人激肽释放酶11(KLK 11)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附技术，微孔板固相包被KLK11特异性捕获抗体，加入待测样本后，样本内激肽释放酶11抗原与固相抗体特异性结合，再加入酶标记KLK11检测抗体形成稳定免疫复合物，洗涤去除游离组分后，底物催化显色，显色强度与样本中KLK11浓度正相关，通过酶标仪读数及标准曲线计算可定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：0.12ng/mL

检测范围：0.28ng/mL~8.96ng/mL

反应时间：37℃温浴 86min；酶标抗体 43min；避光显色 18min

保存条件：2~8℃储存，板条剩余部分必须密封防潮

显色系统：HRP 介导单组份 TMB 显色

检测波长：450nm+650nm

标准曲线绘制：以标准品浓度为 X，校正 OD 值为 Y 建立标准曲线

注意事项：孵育环境温度稳定在 25~37℃，温度波动过大影响结合效率
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

样本制备：血清样本融化稀释，剔除严重黄疸样本，混匀后冰浴保存。

酶标板加液：KLK11 包被 96 孔板，标准品、待测样本、空白对照每孔加样 100μL。

一步添加酶标抗体：全部孔位加入 HRP 标记二抗 55μL，轻晃密封。

恒温孵育：37℃避光孵育 65min。

洗涤步骤：洗涤缓冲液洗板 5 次，浸泡 30s 后拍干残留洗液。

显色反应：等量添加显色 A、B 液，避光显色 14min。

终止读数：终止液终止反应，酶标仪检测 OD 值计算 KLK11 浓度。