线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)测试盒

线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)测试盒

产品介绍：

ICDHm（EC 1.1.1.41)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，同时将NAD+ 还原为NADH，是三羧酸循环的限速酶之一，其催化的反应是细胞NADH主要来源之一。

测定原理

ICDHm催化NAD+ 还原生成NADH，导致340nm处光吸收上升。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

NAD⁺依赖紫外速率法：ICDHm 催化异柠檬酸脱氢生成 α‑酮戊二酸 + NADH，340 nm 吸光度上升速率测酶活。

NADP⁺亚型显色偶联法：以 NADP⁺为辅酶生成 NADPH，再经黄递酶‑四唑盐显色，560 nm 读数。

荧光 NADPH 生成法：产物 NADPH 产生特征荧光，荧光增速反映 ICDHm 活性。

偶联 α‑酮戊二酸脱氢酶信号放大法：生成的 α‑酮戊二酸进入二级酶促反应扩增显色信号，适合低丰度线粒体样本。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定