产品名称 | 小鼠肝内胆管上皮细胞 | 组织来源 | 肝脏组织 |
英文名称 | Mouse Intrahepatic Bile Duct Epithelial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2833 |
方法简介 实验室分离的小鼠肝内胆管上皮细胞采用胶原酶灌注消化法后，再用胶原酶-DNA酶联合消化，接种至预先包被鼠尾胶原的培养瓶中，通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠肝内胆管上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠肝内胆管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠肝内胆管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠基质细胞衍生因子1(SDF-1)elisa试剂盒 | KMS-28PE骨髓瘤 |
大鼠CUB域EGF样信号肽1(SCUBE1)elisa试剂盒 | 兔雪旺细胞 |
大鼠S-骨胶原交联(S-CTx)elisa试剂盒 | 兔骨骼肌微血管内皮细胞 |
大鼠琥珀酰辅酶A合成酶(SCS)elisa试剂盒 | 兔脑静脉血管内皮细胞 |
大鼠β微球蛋白(β-MG)elisa试剂盒 | 大鼠骨骼肌细胞 |
大鼠β细胞素(BTC)elisa试剂盒 | 兔主动脉平滑肌细胞 |
猪蓝耳病病毒GP5蛋白抗体（PRRSV-GP5）elisa试剂盒 | 人原代前列腺成纤维细胞 |
L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞专用培养基 | CCDC30基因过表达细胞株 |
SK-OV-3+LUC人卵巢癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | CFAP52基因过表达细胞株 |
大鼠原代骨骼肌细胞专用培养基 | ZNF750基因过表达细胞株 |
A20细胞专用培养基 | TMPRSS6基因过表达细胞株 |
人原代毛囊成纤维细胞专用培养基 | GNAL基因过表达细胞株 |
小鼠肝内胆管上皮细胞SW620/5FU细胞专用培养基 | RBSN基因过表达细胞株 |
A-427细胞专用培养基 | ALKBH8基因过表达细胞株 |
冻存复苏：液氮取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，留有少量冰晶取出，酒精擦拭外壁进入超净台。
悬液转移：无菌开启冻存管，细胞悬液转移至肝内胆管上皮细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔混匀。
离心洗涤：1000r/min 离心 5min，离心结束，弃去上层冻存上清，留存底部细胞沉淀。
重悬细胞：加入预热专用完全培养基，轻柔吹打沉淀打散细胞团，制备单细胞悬液。
接种铺板：细胞计数，按标准密度接种，十字摇晃培养瓶，细胞均匀铺底。
恒温孵育：置于 37℃、5% CO₂培养箱静置 24h，不移动培养瓶，等待上皮细胞贴壁。
换液观察：24h 更换新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察多边形上皮细胞形态，汇合 80% 开展后续实验。
关键字： 小鼠肝内胆管上皮细胞;肝脏组织;
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