产品名称 | 大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞) | 组织来源 | 外周血组织 |
英文名称 | Rat Peripheral Blood Mature Dendritic Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3570 |
方法简介 实验室分离的大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞)采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞)经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞)完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 未分化
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：4-6周龄清洁级SD大鼠，体重180-220g，每只可获得0.8-1.5×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶、MEM培养基
分离纯化步骤
抗凝血液经Ficoll-Hypaque梯度离心分离外周血单个核细胞（PBMCs），PBS洗涤后重悬
细胞悬液经200目滤网过滤去除组织碎片，400g离心10分钟收集细胞沉淀，PBS洗涤1次
经Percoll不连续密度梯度离心分离目标细胞层，PBS洗涤后收集
原代培养要点
细胞悬浮于完全培养基中，按1-5×10⁵ cells/mL密度接种于24孔板，37℃、5% CO₂培养箱悬浮培养
细胞呈悬浮生长，圆形、折光性强，不贴壁，换液时采用半量换液法补充新鲜培养基
常见问题优化
细胞活化状态改变：缩短体外培养时间，避免过度刺激导致细胞表型改变
细胞活力差：操作全程保持低温，使用新鲜配制试剂，离心力不宜过高
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠对甲酚(p-cresol)elisa试剂盒 | KNS-60脑部多形性成釉细胞瘤 |
大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)elisa试剂盒 | 小鼠肾腺细胞 RAG（种属鉴定） |
大鼠前列腺素I2(PCI2)elisa试剂盒 | 人乳腺细胞MDA-MB-468(STR鉴定正确) |
大鼠丙酰辅酶A羧化酶β多肽(PCCB)elisa试剂盒 | 人骨髓细胞NCI-H929(STR鉴定正确) |
大鼠对氧磷酶(PON)elisa试剂盒 | 表达HBV毒的人肝细胞HepG2.2.15 (STR鉴定正确) |
大鼠对氧磷酶-1(PON1)elisa试剂盒 | 人肺细胞NCI-H1755(STR鉴定正确) |
猪白蛋白（Albumin）elisa试剂盒 | 人乳腺导管细胞带荧光酶BT474+LUC (STR鉴定正确) |
Marc145非洲绿猴胚胎肾细胞专用培养基 | PRKCE基因过表达细胞株 |
MDA-MB-231+LUC人乳腺癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | CAMK4基因过表达细胞株 |
大鼠原代肺微血管内皮细胞专用培养基 | DND1基因过表达细胞株 |
羊原代肺成纤维细胞专用培养基 | MCMDC2基因过表达细胞株 |
人原代胰腺导管上皮细胞专用培养基 | C12orf4基因过表达细胞株 |
大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞)RAMOS细胞专用培养基 | FSHR基因过表达细胞株 |
大鼠原代半月板纤维软骨细胞专用培养基 | CEP89基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、双抗。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取外周血组织。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的目标组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化35min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤网过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除未消化组织块。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME调整细胞浓度至100000.0cells/mL，接种于预涂未涂层的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天更换新鲜培养基，倒置显微镜下观察细胞贴壁及悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强。
关键字： 大鼠外周血树突状细胞(成熟DC细胞);外周血组织;
上海莼试生物技术有限公司Shanghai C-reagent Biotechnology Co. Ltd. 专业服务于生命科学领域，拥有分子生物学、医学、药学、化学等方面的科研技术团队，经营科研生化试剂、分析试剂、实验耗材，推出技术先进、质量稳定的科研产品。为全国乃至于世界各地科研机构、工业、电子、医疗、科技等领域的客户，提供系统的产品资源及配套技术服务。推出十几个种类产品线，部分产品接受定制服务！
公司着力立足于生命科学领域，全力打造品质生物科技产品链和技术服务链！