大鼠外周血树突状细胞(未成熟DC细胞)
以SD大鼠(未成熟DC细胞)组织为材料，采用差速贴壁结合密度梯度离心分离外周血树突状细胞，经0.25%胰蛋白酶-EDTA消化后传代，使用含INS/FGF的基础培养基维持细胞生长；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结合siRNA敲低实验检测CD11c, CD83标志物表达，通过Western blot分析蛋白表达谱，并采用qRT-PCR在mRNA水平验证目标基因表达。
产品名称：大鼠外周血树突状细胞(未成熟DC细胞)
英文名称： Rat Peripheral Blood Immature Dendritic Cells
组织来源： 外周血组织
默认种属 ：大鼠
产品规格：5×10^5Cells/T25
方法简介 实验室分离的大鼠外周血树突状细胞(未成熟DC细胞)采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠外周血树突状细胞(未成熟DC细胞)经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠外周血树突状细胞(未成熟DC细胞)完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 未分化
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠外周血树突状细胞(未成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、双抗。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取外周血组织。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的目标组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化44min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤网过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除未消化组织块。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME调整细胞浓度至140000.0cells/mL，接种于预涂未涂层的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天更换新鲜培养基，倒置显微镜下观察细胞贴壁及悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强。
实验动物(SD大鼠或Wistar大鼠，200-250g)需经10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉后，迅速取相应组织，整个过程控制在45分钟以内，否则细胞存活率显著降低。
实验前培养器皿需用0.5%明胶溶液包被1小时，PBS冲洗后晾干使用，该步骤对外周血树突状(未成熟DC)的贴壁和增殖至关重要。
该细胞为贴壁生长型，体外可传代10-15次，建议每2天换液一次，传代比例控制在1:2以内以维持细胞正常形态和功能。
培养基中必须含有RPMI-1640含10% FBS、20ng/ml IL-4和20ng/ml GM-CSF，其中重组生长因子需分装保存于-80°C避免反复冻融，每次使用新鲜稀释至工作浓度以保证实验可重复性。
日常维护中需每日检查细胞形态和培养基颜色，出现浑浊或颜色异常应立即换液并排查污染，传代后24小时内避免换液以利于细胞贴附恢复。
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