产品名称 | 兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞) | 组织来源 | 外周血组织 |
英文名称 | Rabbit Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3753 |
方法简介 实验室分离的兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞)采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞)经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞)完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 未分化
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、MEM培养基
分离纯化步骤
外周血经肝素抗凝处理后，用红细胞裂解液处理去除红细胞，400g离心10分钟收集白细胞沉淀
细胞悬液经200目滤网过滤去除组织碎片，400g离心10分钟收集细胞沉淀，PBS洗涤1次
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心进一步纯化目标细胞
原代培养要点
细胞悬浮于完全培养基中，按1-5×10⁵ cells/mL密度接种于24孔板，37℃、5% CO₂培养箱悬浮培养
悬浮培养条件下细胞活性保持稳定，每2天半量换液维持细胞密度
常见问题优化
目标细胞占比低：优化Ficoll梯度离心条件，改进密度梯度分离策略
细胞活化状态改变：缩短体外培养时间，避免过度刺激导致细胞表型改变
细胞贴壁率低：免疫细胞本为悬浮生长，注意使用低吸附培养器皿
大鼠神经肽A(NKA)elisa试剂盒 | HPAEC人肺动脉内皮细胞 |
大鼠甲状腺钠碘转运体(NIS)elisa试剂盒 | 大鼠视网膜微周细胞 |
大鼠神经损伤诱导蛋白1(NINJ1)elisa试剂盒 | 大鼠海马神经元细胞 |
大鼠钠氢交换因子1(NHE1)elisa试剂盒 | 大鼠膈肌细胞 |
大鼠谷氨酸转运体1(GLT-1)elisa试剂盒 | 大鼠纤维环细胞 |
大鼠谷氨酰胺合成酶(GS)elisa试剂盒 | 小鼠胃黏膜上皮细胞 |
小鼠总胆红素（TBIL）elisa试剂盒 | 大鼠DRG神经元细胞 |
MB49+LUC小鼠膀胱癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | GOLGA8R基因过表达细胞株 |
snu-1人胃癌细胞专用培养基 | ZNF616基因过表达细胞株 |
大鼠原代视网膜微血管周细胞专用培养基 | CASP5基因过表达细胞株 |
A375细胞专用培养基 | LRRC8C基因过表达细胞株 |
人原代卵巢成纤维细胞专用培养基 | GPR22基因过表达细胞株 |
兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞)SW837细胞专用培养基 | GJA3基因过表达细胞株 |
A549细胞专用培养基 | BLNK基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取外周血组织。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的目标组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化44min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤网过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除未消化组织块。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME调整细胞浓度至140000.0cells/mL，接种于预涂未涂层的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天更换新鲜培养基，倒置显微镜下观察细胞贴壁及悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强。
关键字： 兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞);外周血组织;
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