产品名称 | 小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞) | 组织来源 | 骨髓组织 |
英文名称 | Mouse Bone Marrow-derived Immature Dendritic Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3461 |
方法简介 实验室分离的小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 未分化
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄ICR小鼠，体重18-24g，每只取材获0.35-0.75×10⁶个细胞，活力>86%
试剂：胶原酶Type VIII、胰蛋白酶、透明质酸酶、FBS、IMDM培养基
分离纯化步骤
抗凝血液经Ficoll-Hypaque梯度离心分离外周血单个核细胞（PBMCs），PBS洗涤后重悬
细胞悬液经200目滤网过滤去除组织碎片，400g离心10分钟收集细胞沉淀，PBS洗涤1次
利用CD45磁珠阳性选择策略特异性富集白细胞，纯度>90%
原代培养要点
细胞重悬于含相应细胞因子的完全培养基中，按适当密度接种于低吸附培养皿，37℃、5% CO₂培养
悬浮培养条件下细胞活性保持稳定，每2天半量换液维持细胞密度
常见问题优化
细胞贴壁率低：免疫细胞本为悬浮生长，注意使用低吸附培养器皿
细胞活力差：操作全程保持低温，使用新鲜配制试剂，离心力不宜过高
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽38(PACAP38)elisa试剂盒 | BFTC-905膀胱癌 |
大鼠磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(P-AACase)elisa试剂盒 | 人子宫内膜细胞HEC-1-A(STR鉴定正确) |
大鼠前白蛋白(PA)elisa试剂盒 | 人外周巴细胞8E5(STR鉴定正确) |
大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)elisa试剂盒 | 人肝细胞SMMC-7721(STR鉴定正确) |
大鼠二甲基苯胺单加氧酶3(FMO3)elisa试剂盒 | 人宫颈细胞荧光酶标记Hela+luc(STR鉴定正确) |
大鼠二价金属转运蛋白(DMT)elisa试剂盒 | 小鼠小胶质细胞Bv-2 （种属鉴定） |
猪β-防御素124（PBD-124）elisa试剂盒 | 中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交MR1（种属鉴定） |
NCI-H295R人肾上腺皮质细腺癌细胞专用培养基 | ASPN基因过表达细胞株 |
MG63人骨肉瘤细胞专用培养基 | TMEM260基因过表达细胞株 |
兔原代膀胱基质成纤维细胞专用培养基 | GABPB2基因过表达细胞株 |
人原代脑血管外膜成纤维细胞专用培养基 | CYP46A1基因过表达细胞株 |
人原代心脏微血管周细胞专用培养基 | TICAM1基因过表达细胞株 |
小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)RPMI-1640（NaHCO31.5g/L）培养基 | ZBBX基因过表达细胞株 |
小鼠原代子宫内膜干细胞专用培养基 | GCKR基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷PBS液、RICAM+淋巴细胞分离液混合消化液、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取骨髓组织，冰预冷PBS液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入RICAM消化液，37℃水浴消化36min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤膜过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至未涂层预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天更换新鲜培养基，定期倒置显微镜观察悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强及生长情况。
关键字： 小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞);骨髓组织;
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