产品名称 | 小鼠骨外膜细胞 | 组织来源 | 骨外膜组织 |
英文名称 | Mouse Periosteal Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3566 |
方法简介 实验室分离的小鼠骨外膜细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠骨外膜细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠骨外膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠骨外膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄ICR小鼠，体重18-24g，每只取材获0.35-0.75×10⁶个细胞，活力>86%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA于37℃振荡消化120-180分钟
细胞悬液依次过70目、100目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>80%
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按2×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁后呈典型形态，生长速率适中，每3-5天传代一次，传代后活力保持良好
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠食欲素(OX)elisa试剂盒 | Nalm6-LUC-puro人B淋巴白血病细胞 |
大鼠卵清蛋白特异性IgG抗体(OVA-sIgG)elisa试剂盒 | 人脐带间充质干细胞 |
大鼠卵清蛋白特异性IgA抗体(OVA-sIgA)elisa试剂盒 | 人脾星状细胞 |
大鼠哇巴因(Ouabain)elisa试剂盒 | 人表皮干细胞 |
大鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)elisa试剂盒 | 人毛囊细胞 |
大鼠分拣蛋白1(SORT1)elisa试剂盒 | 大鼠肾动脉内皮细胞 |
猪Toll样受体3（TLR3）elisa试剂盒 | 人Treg细胞 |
SK-MEL-1人皮肤黑色素瘤细胞专用培养基 | FIZ1基因过表达细胞株 |
MRC-5（有限人胚肺成纤维细胞专用培养基 | DRD5基因过表达细胞株 |
人原代脑血管外膜成纤维细胞专用培养基 | CRHR2基因过表达细胞株 |
大鼠原代主动脉外膜成纤维细胞专用培养基 | TMEM260基因过表达细胞株 |
人原代胎盘绒毛膜滋养层细胞专用培养基 | GPR6基因过表达细胞株 |
小鼠骨外膜细胞SF21细胞专用培养基 | GALNT18基因过表达细胞株 |
人原代气管上皮细胞专用培养基 | DND1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（Ⅰ型胶原酶、胶原酶Ⅱ）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出骨骼组织。
2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅰ型胶原酶+胶原酶Ⅱ混合消化液，37℃消化36min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察形态因细胞类型而异，贴壁或悬浮生长及生长状态。
关键字： 小鼠骨外膜细胞;骨外膜组织;
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