产品名称 | 兔骨外膜细胞 | 组织来源 | 骨外膜组织 |
英文名称 | Rabbit Periosteal Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3769 |
方法简介 实验室分离的兔骨外膜细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔骨外膜细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔骨外膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔骨外膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA于37℃振荡消化120-180分钟
消化液经70目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、500g离心12分钟收集细胞沉淀
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞浓度至2×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
细胞贴壁后呈典型形态，生长速率适中，每3-5天传代一次，传代后活力保持良好
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠Nogo66受体同源物1(NGRH1)elisa试剂盒 | PC-9/LUC人肺腺癌细胞 |
大鼠脑红蛋白(NGB)elisa试剂盒 | 小鼠睾丸支持细胞 |
大鼠核因子κB1(NF-κB1)elisa试剂盒 | 小鼠肝成纤维细胞 |
大鼠神经丝轻链蛋白(NF-light)elisa试剂盒 | 小鼠主动脉弓平滑肌细胞 |
大鼠谷草转氨酶线粒体同工酶(mAST)elisa试剂盒 | 小鼠心室心肌细胞 |
大鼠谷胱甘肽S转移酶(GST)elisa试剂盒 | 小鼠中耳上皮细胞 |
小鼠自噬基因Beclin 1（BECN1）elisa试剂盒 | 小鼠肾小球系膜细胞 |
MC3T3-E1subclone 14小鼠颅顶前骨亚克隆14细胞专用培养基 | PPP1R21基因过表达细胞株 |
SU-DHL-2人B淋巴瘤 细胞专用培养基 | CCDC60基因过表达细胞株 |
兔原代阴道黏膜上皮细胞专用培养基 | GNAT2基因过表达细胞株 |
A549细胞专用培养基 | ADGRG3基因过表达细胞株 |
人原代颈静脉球瘤细胞专用培养基 | ADCK1基因过表达细胞株 |
兔骨外膜细胞T98G细胞专用培养基 | FANCC基因过表达细胞株 |
AGS细胞专用培养基 | EGFL6基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅰ型胶原酶、胶原酶Ⅱ）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出骨骼组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅰ型胶原酶+胶原酶Ⅱ混合消化液，37℃消化34min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察形态因细胞类型而异，贴壁或悬浮生长及生长状态。
关键字： 兔骨外膜细胞;骨外膜组织;
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