兔肾皮质上皮细胞

兔肾皮质上皮细胞

以日本大耳白兔肾皮质组织为材料，采用酶消化法结合免疫阳性分选分离上皮细胞，经0.25%胰蛋白酶-EDTA消化后传代，使用含10%胎牛血清的完全培养基维持细胞生长；利用Nanostring数字计数结合Matrigel侵袭实验检测PAX8, MUC1标志物表达，通过Western blot分析蛋白表达谱，并采用qRT-PCR在mRNA水平验证目标基因表达。

产品名称：兔肾皮质上皮细胞

英文名称： Rabbit Renal Cortical Epithelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔肾皮质上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔肾皮质上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔肾皮质上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔肾皮质上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。

2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶、胶原酶Ⅱ、透明质酸酶）、K-SFM培养基 + EGF + BSA、双抗。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取肾。

2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。

3. 将纯化后的肾组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+胶原酶Ⅱ+透明质酸酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化41min。

2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。

3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。

2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA调整细胞浓度至110000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。

3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接。

实验动物(新西兰大白兔，2.0-3.0kg)需经戊巴比妥钠(30mg/kg)耳缘注射麻醉后，迅速取肾脏组织，整个过程控制在45分钟以内，否则细胞存活率显著降低。

培养器皿提前用0.1mg/ml纤连蛋白包被过夜，4°C保存，使用前用PBS洗涤2次，该处理可显著促进皮质上皮的贴壁生长。

该细胞贴壁生长，增殖较为缓慢，每3-4天换液一次，传代比例建议1:2至1:4，长期培养需注意细胞衰老标记物的检测。

培养过程中需持续添加K-SFM无血清培养基补充EGF和BSA以维持细胞最佳生长状态，抗生素浓度不宜过高以免影响细胞代谢活性，建议常规使用1% P/S即可。

换液操作需在生物安全柜中进行，使用预温的培养基缓慢加入培养孔/皿中，避免产生气泡和液流冲击导致细胞脱落或损伤。