产品名称 | 兔肾上腺皮质细胞 | 组织来源 | 肾上腺组织 |
英文名称 | Rabbit Adrenocortical Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3792 |
方法简介 实验室分离的兔肾上腺皮质细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肾上腺皮质细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔肾上腺皮质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肾上腺皮质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃振荡消化45-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞在体外培养条件下生长稳定，形态保持一致性，连续培养3-5代后仍保持原有表型特征
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
大鼠神经细胞粘附分子1(NCAM-1;CD56)elisa试剂盒 | hepG2-coGFP-PURO人肝癌细胞 |
大鼠N-乙酰转移酶2(NAT2)elisa试剂盒 | 兔耳软骨细胞 |
大鼠Na-K-ATP酶(Na-K-ATPase)elisa试剂盒 | 兔细胞 |
大鼠NAD合成酶(NADSYN)elisa试剂盒 | 兔基底细胞 |
大鼠骨特异性碱性磷酸酶(BAP)elisa试剂盒 | 兔内括约肌平滑肌细胞 |
大鼠骨调蛋白(OMD)elisa试剂盒 | 兔脉络膜成纤维细胞 |
小鼠转化生长因子α（TGF-α）elisa试剂盒 | 兔海绵体内皮细胞 |
neuro-2a小鼠脑神经瘤细胞专用培养基 | F12基因过表达细胞株 |
CT26+LUC小鼠结肠癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | B3GNT4基因过表达细胞株 |
猪原代卵巢颗粒细胞专用培养基 | FAM227B基因过表达细胞株 |
ARPE-19细胞专用培养基 | SARM1基因过表达细胞株 |
人原代甲状腺上皮细胞专用培养基 | CHST7基因过表达细胞株 |
兔肾上腺皮质细胞TT细胞专用培养基 | CYP4F22基因过表达细胞株 |
AV3细胞专用培养基 | ADCK1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取目标组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化30min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察形态因细胞类型而异，贴壁或悬浮生长及生长情况。
关键字： 兔肾上腺皮质细胞;肾上腺组织;
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