兔棕色脂肪细胞

兔棕色脂肪细胞

基于胶原酶消化技术从日本大耳白兔棕色组织中分离原代脂肪细胞，在MCDB-131培养基中培养扩增；利用表面增强拉曼散射(SERS)结合ATAC-seq对Adiponectin, FABP4进行多参数检测，并通过Western blot验证目标蛋白的表达与功能。

产品名称：兔棕色脂肪细胞

英文名称： Rabbit Brown Adipocytes

组织来源： 棕色脂肪组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔棕色脂肪细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔棕色脂肪细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔棕色脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 圆形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔棕色脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅰ+BSA混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取脂肪组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅰ消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察圆形，贴壁生长，胞质内可见脂滴空泡及生长情况。

实验动物(新西兰大白兔，2.0-3.0kg)需经戊巴比妥钠(30mg/kg)耳缘注射麻醉后，迅速取脂肪组织，整个过程控制在45分钟以内，否则细胞存活率显著降低。

实验用培养皿应提前用0.01%聚鸟氨酸室温孵育2小时，PBS洗涤后风干，该预处理对色脂肪的初始贴附具有决定性作用。

该细胞具有贴壁生长特性，培养过程中需维持培养基pH在7.2-7.4之间，每2天更换新鲜培养基，传代时采用0.25%胰蛋白酶消化。

培养基配方中DMEM/F12含10% FBS、1% P/S、500μM IBMX、1μM地塞米松和5μg/ml胰岛素为必需组分，添加顺序和方式需严格按照SOP操作，错误的添加顺序可能导致生长因子失活或沉淀形成。

换液时仅更换1/2至2/3体积的新鲜培养基，避免完全换液造成已贴壁细胞脱落，操作时吸管尖端距培养面至少1cm高处缓慢加入。