Terminal Deoxynucleotidyl Transferase(末端脱氧核苷酸转移酶,TdT)是一种模板非依赖型DNA聚合酶,催化脱氧核苷酸重复添加到寡核苷酸、单链和双链DNA的3'羟基端。TdT反应需要含有至少3个碱基的短序列作为引物。以RNA为模板时,TdT性能严格依赖于受体RNA 3’-末端的三级结构和核苷酸的种类。一般TdT对RNA模板的作用效率比DNA模板低。
应用
合成同聚物和杂聚物;线性双链DNA的3’-OH末端同聚物加尾;寡聚脱氧核苷酸和DNA标记;5’-RACE(快速扩增cDNA末端);凋亡反应的原位定位。
来源
大肠杆菌细胞,含有编码牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶的基因。
单位定义
37℃,60 min内将1 nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。
抑制与失活
抑制剂:金属螯合剂、铵、氯化物、碘化物和磷酸盐离子。
失活:加入EDTA,70℃加热10 min。
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