背景[1-3]
TLR2抗体是一种针对Toll样受体2（Toll-like Receptor 2，简称TLR2）的特异性抗体。TLR2是天然免疫系统中特异的Ⅰ-型跨膜受体及病原模式识别受体，在急性炎症反应、细胞信号转导和细胞凋亡中起重要作用。它由766个氨基酸残基组成，分子量约90kD，主要参与对微生物的天然免疫应答，与TLR1共同介导对细菌脂蛋白或脂肽的天然免疫应答。
TLR2抗体可以用于多种生物学应用，例如免疫组织化学。通过这种技术，可以研究TLR2在不同组织和细胞类型中的表达水平，从而了解其在免疫细胞中的分布和调控。此外，TLR2抗体也可以用于其他类型的实验，如Western Blotting、流式细胞术和免疫共沉淀等，以研究TLR2的功能、表达水平以及与其他分子的相互作用。
TLR2抗体
在制备TLR2抗体的过程中，首先需要选择TLR2蛋白的特定抗原位点，通常是一个充分暴露于细胞表面的外显子区域，合成相应的多肽作为免疫原。然后，将这个免疫原与适当的佐剂混合，注射到实验动物体内以激发免疫反应。收集动物的血清，并通过蛋白A/G层析等方法从血清中分离和纯化TLR2抗体。
应用[4-5]
TLR2抗体可以用于车前草多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的调节作用及机制的研究
车前草多糖对巨噬细胞免疫调节的作用机制为进一步研究车前草多糖(PLP)调节巨噬细胞免疫功能的机制,本试验检测TLR2/4受体在巨噬细胞识别PLP中的作用,并研究PLP对巨噬细胞NF-κB和MAPK信号通路的影响,在阻断TLR2受体和MAPK条件下观察NF-κB和MAPK两条信号通路在PLP调节巨噬细胞免疫功能中的作用关系。
试验用PLP(50μg/m L)与巨噬细胞共培养,并在不同时间点收集细胞和培养上清液,用荧光定量PCR和Western-blot法检测TLR-NF-κB和MAPK信号通路相关基因m RNA表达水平和蛋白表达量;以TLR2抗体(anti-TLR2)和P-ERK阻断剂(U120)分别阻断TLR2和P-ERK表达,检测巨噬细胞相应基因m RNA和蛋白表达水平,以及巨噬细胞分泌TNF-α的变化情况。
试验结果显示,PLP刺激巨噬细胞5 h,TLR2和TLR4的m RNA表达量均显著升高(P<0.01),且随着PLP刺激时间推移表达量降低,用TLR2抗体阻断TLR2后,anti-TLR2(25μg/m L)+PLP组TLR2/4m RNA表达水平分别为1.88±0.18和0.91±0.23较PLP组显著降低;anti-TLR2(10μg/m L)+PLP和anti-TLR2(25μg/m L)+PLP组TNF-α浓度较PLP组均显著下降(P<0.01),anti-TLR2(10和25μg/m L)处理巨噬细胞后,PLP不能提高巨噬细胞TNF-α分泌量;PLP刺激巨噬细胞后其NF-κB和My D88的m RNA表达量较对照组显著升高(P<0.01),当TLR2被阻断后,NF-κB和My D88 m RNA的表达量较PLP组均显著下调(P<0.01);Western-blot结果显示,PLP刺激巨噬细胞15 min和30 min后,其P65蛋白表达量显著上调,在1 h后P65蛋白随即降低至正常水平;ERK1、JNK1和P38m RNA表达水平在PLP刺激后显著升高(P<0.05),ERK2和JNK2 m RNA表达水平与对照组无显著性差异(P>0.05);
用anti-TLR2阻断巨噬细胞TLR2后,PLP不能引起MAPK三条通路各亚基m RNA表达水平升高;与对照组相比,PLP刺激15 min和30 min后,巨噬细胞ERK1和P-ERK1/2蛋白表达水平均显著升高,ERK2蛋白表达水平没有显著变化,并随着时间推移而降低;同时经P-ERK抑制剂U120处理后,PLP刺激巨噬细胞30 min后不能引起其P-ERK1/2磷酸化水平的升高;经P-ERK抑制剂处理后,PLP不能提高NF-κB和My D88 m RNA表达量,同时也不能提高巨噬细胞NF-κB P65蛋白表达水平,且较PLP处理组差异极显著(P<0.01);当用anti-TLR2和U120分别处理细胞后,PLP诱导的i NOS m RNA表达量显著降低(P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.01)。
试验结果提示,巨噬细胞细胞对PLP识别的主要受体是TLR2;TLR2-My D88-MAPK-NF-κB信号通路是PLP作用于巨噬细胞的通路之一;MAPK通路可能参与PLP调节巨噬细胞i NOS的表达。上述结果表明,车前草多糖可通过TLR2-MyD88-MAPK-NF-κB信号通路提高巨噬细胞分泌、吞噬和增殖能力从而调节巨噬细胞免疫功能;并且可以提高巨噬细胞ERK1、JNK1、P38和NF-κB蛋白和m RNA表达,提示ERK1、JNK1、P38和NF-κB为车前草多糖的药理作用靶点。
参考文献
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