背景及概述[1]
鱼油中n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)在人体中具有重要的生物学意义，其特征脂肪酸二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的生理活性己经明确，EPA具有预防冠心病、降血压、消除疲劳、预防动脉粥样硬化和脑血栓、抗癌等生理活性，DHA能显著地促进婴儿的智力发育，改善大脑机能，提高记忆力，EPA和DHA是生产预防心血管疾病和婴儿益智食品的良好基料。天然鱼油中EPA和DHA主要以甘油酯的形式存在，但EPA和DHA含量相对较低(20％～30％)，其医疗和保健效果并不理想。
为了提高EPA和DHA的保健和医疗效果，在过去，众多研究者将甘油酯中的EPA和DHA转酯化或者水解转化为相应的甲乙酯或者游离形式，然后再通过各种物理或者化学方法提高DHA和EPA的含量，以此来增强DHA和EPA的保健功效。但是随后，对鱼油保健品，人们对其游离脂肪酸型、乙酯型的安全性提出了质疑，1990年美国FDA的研究人员通过大量实验，发现EPA和DHA的甘油酯型、甲乙酯型和游离脂肪酸型在人体内消化吸收有差异。
Ikuo等研究的结果也表明，EPA和DHA乙酯型在人体中不仅消化和吸收比较困难，而且可能存在安全隐患；游离型的EPA和DHA虽然易于被人体消化和吸收，但是容易氧化生成对人体有害的物质，而且有酸味、口感不好，直接作为食用难以被人们接受；而EPA和DHA的甘油酯型尤其是DHA甘油三酯(二十二碳六烯酸甘油三酯)在消化道中的水解速率比物理或化学方法富集得到的相应的甲酯或乙酯快，同时，EPA和DHA的甘油酯比其甲酯或乙酯更适合机体消化吸收，EPA和DHA甘油酯型性质稳定、不易氧化、口感好，且甘油三酯是EPA和DHA的天然存在形式，因此EPA和DHA甘油三酯(二十二碳六烯酸甘油三酯)型是鱼油保健品和药品的产品型式。
制备[1]
方法：准确称取精制鱼油样品10g，加入2mol/LNaOH乙醇水溶液150mL，乙醇/水比例(v/v)为6：1，充氮保护，在60℃条件下皂化60min，加入正己烷100mL萃取未皂化物两次，水化层用100mL3mol/L的HCl酸化，然后用正己烷100mL×3萃取水解出来的游离n-3PUFA，水洗至中性，过无水Na2SO4，N2吹干溶剂得到n-3PUFA，经化学法水解鱼油水解率为91％，EPA得率为86％，DHA得率为84％。
将鱼油水解后得到的包含EPA、DHA的n-3PUFA混合液2g上C18柱进行层析分离，流动相为甲醇/水，70～100％甲醇梯度洗脱，洗脱液进行分部收集，采用质谱对层析样品进行快速分析，并利用HPLC检测EPA、DHA收集液的纯度，经反复层析分离后制得纯度较高的EPA、及DHA产品，其中EPA纯度为92％，DHA纯度为93％。
以制备得到的较高纯度的EPA和甘油为底物、及DHA和甘油为底物，有机相脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯：在反应容器中，加入正己烷12mL，甘油0.05g，EPA或DHA0.6g，脂肪酶Novozym435添加量为0.15g，充氮保护，在50℃条下150rpm振荡水浴进行酯化反应，反应12h后添加1g分子筛除去反应生成的水份，反应48h后得到合成产物，EPA甘油酯的酯化率为94％，EPA甘油酯中甘油三酯含量为94.2％，DHA甘油酯的酯化率为95％，DHA甘油三酯(二十二碳六烯酸甘油三酯)含量为94％。
应用[2]
二十二碳六烯酸(DocosahexaenoicAcid,DHA)是鱼油的特征脂肪酸，由于在人体内不能合成而成为必需脂肪酸(EssentialFattyAcids,EFAs)，具有重要的生物学意义.DHA主要以甘油酯型、游离型和甲乙酯型3种形式存在，其在人体内消化吸收却有明显的差异.DHA的甲、乙酯型吸收率低，且可能存在安全隐患；游离型虽然吸收率高，但口感差、有酸味，且易氧化，难被人接受；而甘油酯型是DHA的天然存在形式，其性质稳定、易被人体消化吸收。尽管DHA都是对人体有益的ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PolyunsaturatedFattyAcids,ω-3PUFAs)，但其生物医学功能却有较大差别，高纯度DHA甘油三酯(二十二碳六烯酸甘油三酯)对过敏性皮炎、支气管哮喘和花粉过敏症有很好的治疗和预防效果。
主要参考资料
[1] CN200810196271.3一种从鱼油中富集n-3多不饱和脂肪酸甘油酯的方法
[2] 高纯度EPA/DHA甘油三酯的酶法合成