二十二碳六烯酸甘油三酯

二十二碳六烯酸(DocosahexaenoicAcid,DHA)是鱼油的特征脂肪酸，由于在人体内不能合成而成为必需脂肪酸(EssentialFattyAcids,EFAs)，具有重要的生物学意义.DHA主要以甘油酯型、游离型和甲乙酯型3种形式存在，其在人体内消化吸收却有明显的差异.DHA的甲、乙酯型吸收率低，且可能存在安全隐患；游离型虽然吸收率高，但口感差、有酸味，且易氧化，难被人接受；而甘油酯型是DHA的天然存在形式，其性质稳定、易被人体消化吸收。DHA都是对人体有益的ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PolyunsaturatedFattyAcids,ω-3PUFAs)，但其生物医学功能却有较大差别，高纯度DHA甘油三酯(二十二碳六烯酸甘油三酯)对过敏性皮炎、支气管哮喘和花粉过敏症有很好的治疗和预防效果。准确称取精制鱼油样品10g，加入2mol/LNaOH乙醇水溶液150mL，乙醇/水比例(v/v)为6：1，充氮保护，在60℃条件下皂化60min，加入正己烷100mL萃取未皂化物两次，水化层用100mL3mol/L的HCl酸化，然后用正己烷100mL×3萃取水解出来的游离n-3PUFA，水洗至中性，过无水Na2SO4，N2吹干溶剂得到n-3PUFA，经化学法水解鱼油水解率为91％，EPA得率为86％，DHA得率为84％。将鱼油水解后得到的包含EPA、DHA的n-3PUFA混合液2g上C18柱进行层析分离，流动相为甲醇/水，70～100％甲醇梯度洗脱，洗脱液进行分部收集，采用质谱对层析样品进行快速分析，并利用HPLC检测EPA、DHA收集液的纯度，经反复层析分离后制得纯度较高的EPA、及DHA产品，其中EPA纯度为92％，DHA纯度为93％。以制备得到的较高纯度的EPA和甘油为底物、及DHA和甘油为底物，有机相脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯：在反应容器中，加入正己烷12mL，甘油0.05g，EPA或DHA0.6g，脂肪酶Novozym435添加量为0.15g，充氮保护，在50℃条下150rpm振荡水浴进行酯化反应，反应12h后添加1g分子筛除去反应生成的水份，反应48h后得到合成产物，EPA甘油酯的酯化率为94％，EPA甘油酯中甘油三酯含量为94.2％，DHA甘油酯的酯化率为95％，DHA甘油三酯(二十二碳六烯酸甘油三酯)含量为94％。