赤霉素GA3的制备方法

2020/10/26 11:48:35

背景及概述[1]

赤霉素(Gibberellins,简称GAs),又称九二零,是一种天然的植物生长调节剂。赤霉素属于生物体内的一类四环二萜类化合物,至今已发现100多种。常见具有生物活性的主要有赤霉素GA1、GA3、GA4、GA7等,赤霉素与生长素(auxin)、细胞分裂素(CTK)、脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)以及油菜素甾醇(BR)并列为植物六大激素。赤霉素主要对植物生长具有多种生理功能,可以调节植物生根、发芽、生长以及开花结果等过程,因此赤霉素在农业生产和酿造业中有着广泛的应用。其中赤霉素GA3是应用最为广泛的赤霉素之一。赤霉素GA3又名赤霉酸、“九二0”、“奇宝”,美国、日本等国家规定水果和蔬菜中赤霉素GA3的最高残留限量为0.2mg/kg,而我国目前还未出台相应的农产品限量标准。目前对赤霉素GA3的毒理学安全性评价的报道很少,也无赤霉素GA3导致人体中毒的报道,所以有必要对赤霉素GA3的安全性进行评价。

急性毒性实验结果[1]

经过预实验可知赤霉素GA3的急性毒性较小,因此采用耐受剂量法对其进行急性毒性评价。将质量浓度为0.75g/mL的赤霉素GA3按照0.4mL/20g的灌胃剂量给予小鼠,连续观察14d,小鼠未出现死亡情况,也没有任何中毒表现。表明赤霉素GA3对昆明种小鼠经口急性毒性耐受剂量>15g/kg,即LD50>15000mg/kg。实验结果表明,赤霉素GA3对昆明种小鼠经口耐受剂量>15 g/kg,即LD50>15000mg/kg,急性毒性较低。但有研究表明,赤霉素GA3对动物的肝脏功能会产生一定影响,能促进鼠仔出生后的生长发育,有神经毒害作用,还会增加患皮肤炎症和膀胱疾病的机率。

制备[2-3]

方法1:一种利用磁性树脂分离提纯赤霉素GA3的工艺,其具体步骤如下:

(1)将含赤霉素GA3的溶液用酸调节pH至2.0~5.0,加入助滤剂过滤,得滤液备用;其中含赤霉素GA3的溶液为赤霉素工业生产中含赤霉素GA3的分离残液;

(2)将磁性树脂装入垂直安置的树脂柱,置于可调磁场中,磁感应强度为1.3~1.8T,将步骤(1)得到的滤液以2~5BV/h的流速流过树脂柱;

(3)吸附结束后,改变外加磁场,先用体积浓度为15%~20%的乙醇溶液以0.5~1.2BV/h的流速流过树脂柱,解吸除杂,弃去解吸液;再用体积浓度为70%~75%的乙醇溶液以2~3BV/h的流速对树脂柱进行解吸,得解吸液;

(4)将步骤(3)得到的解吸液浓缩结晶。

方法2:采用藤仓赤霉菌978液体发酵生产赤霉素GA3

采用藤仓赤霉菌978液体发酵生产赤霉素GA3的具体方法如下:将藤仓赤霉978接种到试管斜面PDA培养基中,在28℃条件下静置培养3~4天。用20mL无菌水洗下孢子,将孢子悬浮液按照接种量为5%转接至种子培养基,在28℃、摇床转速180rpm条件下培养36h,获得种子液。按照接种量为5%将种子液转接至发酵培养基,在28℃、摇床转速180rpm条件下培养7天。发酵结束后,检测发现发酵液中菌体干重17g/L,GA3含量2080mg/L。

应用[4-5]

1.赤霉素(GA3)和脱落酸(ABA)对不同水稻品种生长和生理特性及GA20ox2、GA3ox2基因表达的影响。

以5个水稻品种4叶1心期的幼苗为材料,比较研究了1μmol/LGA3和10mg/LABA处理对不同水稻品种生长发育、生理特性及基因表达的影响。结果表明,GA3处理能够促进水稻地上部分伸长生长,抑制根伸长生长;同时,5个品种叶片的叶绿素含量、可溶性蛋白质含量和细胞膜透性呈上升趋势。10mg/LABA处理则严重抑制种子萌发和地上部伸长生长;5个品种叶片的叶绿素含量、可溶性蛋白质含量和细胞膜透性则呈现下降趋势。用RT-PCR方法对GA20ox2和GA3ox2基因表达水平的变化进行检测,结果表明GA3处理后,日本晴GA20ox2基因表达略微下调,其余4个品种的GA20ox2基因表达上调。ABA处理抑制GA20ox2基因表达。GA3ox2基因表达也受GA3和ABA调控。在南粳44、关东194和日本晴中,GA3诱导GA3ox2表达,ABA显著抑制GA3ox2表达。

2.采前喷施赤霉素(GA3)对杧果农艺性状及采后品质的影响。

1)采前喷施GA3对’贵妃’杧果产量的影响50mg/L和100mg/L采前喷施GA3处理,提高了单果重和无胚果的座果率,从而显著增加了产量;采前进行250mg/LGA3喷施处理,可使无胚果单果重显著增加,但降低了坐果率,导致对单株增产不显著。此外,随着GA3处理浓度的增加,果形指数越大,对果实的拉长作用越明显。

2)采前喷施GA3对’贵妃’杧果品质的影响50mg/LGA3处理的果实在完熟期的果肉可溶性固形物含量略高于对照组,二者差别不大,100mg/L和250mg/LGA3处理的果实TSS均显著低于对照组。3个浓度的GA3处理果实的可滴定酸含量均高于对照组,其中250mg/LGA3处理果实可滴定酸含量(0.143%)比对照组(0.120%)高出18.85%,差异显著(p<0.05)。3个浓度的GA3处理果实的Vc含量均显著低于对照组,并且随着GA3处理浓度的增加,Vc含量逐渐降低。因此采前GA3喷施浓度高于50mg/L,会导致果实食用品质下降。

3)采前喷施GA3对’贵妃’杧杧果采后后熟软化和抗病性的影响GA3处理的果实与对照组相比,在贮藏期间硬度降低速度减缓,但在完熟期其硬度均低于对照组。GA3处理会延缓杧果贮藏期间原果胶含量的降低,抑制可溶性果胶含量的上升,不同浓度GA3处理之间有略微差异,但是差异不显著。采前GA3处理乙烯释放高峰推迟了2天,并且随着GA3浓度的增加果实乙烯释放速率逐渐降低,其中250mg/LGA3处理乙烯释放高峰值比对照组降低了51%。3个GA3处理浓度果实采后发病率均上升,加重了采后病害的发生。

4)采前喷施GA3对’贵妃’杧果果皮颜色的影响在生理成熟期(采收时),随GA3施用浓度的升高,杧果果皮类胡萝卜素含量逐渐降低,花色苷含量逐渐增加,叶绿素含量变化不大,因此采前进行GA3喷施处理的杧果,其果皮颜色更加鲜艳。在完熟期(可食用状态),随GA3施用浓度的升高,各处理果皮中类胡萝卜素含量相差不大,但花色苷和叶绿素含量逐渐增加,3个GA3处理与对照组相比,叶绿素含量均存在显著差异(p<0.01),250mg/LGA3处理果皮叶绿素含量(22.72μg/g)比对照组(9.61μg/g)高136.37%,部分果实外观出现滞绿现象。

主要参考资料

[1] 赤霉素GA3急性毒性和遗传毒性

[2] CN201510864578.6一种利用磁性树脂分离提纯赤霉素GA3的工艺

[3] CN201710022663.7一种利用藤仓赤霉菌渣生产赤霉素GA3的方法

[4] 赤霉素(GA3)和脱落酸(ABA)对不同水稻品种生长和生理特性及GA20ox2、GA3ox2基因表达的影响

[5] 采前喷施赤霉素(GA3)对杧果农艺性状及采后品质的影响

免责申明 ChemicalBook平台所发布的新闻资讯只作为知识提供,仅供各位业内人士参考和交流,不对其精确性及完整性做出保证。您不应 以此取代自己的独立判断,因此任何信息所生之风险应自行承担,与ChemicalBook无关。如有侵权,请联系我们删除!
阅读量:1184 0

欢迎您浏览更多关于赤霉素GA3的相关新闻资讯信息