背景[1-3]
玫瑰红钠琼脂培养基用于药品和生物制品中霉菌和酵母菌的计数、分离和培养。颗粒培养基是目前流行的一种培养基形式,具有不会产生粉尘,安全环保,易于溶解等特点。可有效减少实验人员在配置培养基时,吸入粉尘及有毒有害成分,起到保护实验人员的作用;同时可以减少粉尘对环境的污染,减少实验室空间悬浮颗粒的数量。

玫瑰红钠琼脂培养基中蛋白胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;磷酸二氢钾为缓冲剂;硫酸镁提供必须的微量元素;玫瑰红钠作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长,并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长;琼脂是培养基的凝固剂。使用方法(计数用法):
1、称取本品30.5g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌20min。
2、检样的稀释处理,略。
3、根据对样品污染情况的估计,选择3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1.0mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2~3个平皿。
4、将凉至45℃左右的培养基约15mL注入平皿中,待琼脂凝固后,倒置于23~28℃温箱中培养72h,对于菌落微小点计困难的平板可延续培养到4~5d再进行观察计数。
5、计数、报告:
(1)计数:一般情况下,玫瑰红钠平板计点霉菌或酵母菌数,如在该平板上生长的细菌菌落数多于营养琼脂平板上生长的菌落数时,则应同时点计细菌数,并将该菌数作为供试品的细菌数报告。固体供试品在玫瑰红钠琼脂平板上点计霉菌落数,液体供试品则需在玫瑰红钠琼脂平板上点计霉菌与酵母菌菌数;含蜂蜜及王浆的合剂需以玫瑰红钠平板的霉菌菌落数加上酵母膏粉胨葡萄糖琼脂平板的酵母菌菌落数作为供试品的霉菌、酵母菌总数。
(2)报告:通常选择菌落数在30~100之间的稀释级的平板计数,以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
应用[4][5]
用于化妆品用透明质酸钠的质量标准及检验方法研究
透明质酸(hyaluronic acid,HA),又名玻璃酸,是由D-葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖双糖重复单位通过p-(1→4)糖苷键和β-(1→3)糖苷键构成的无分支的糖胺聚糖,广泛存在于动物组织的细胞间质和某些细菌的夹膜中。其相对分子质量(Mr)一般为1×105~1×107D,分子中两种单糖的摩尔比为1:1。HA常用的制备方法有动物组织提取法和细菌发酵法。由于HA具有良好的保湿作用、营养作用、皮肤损伤的修复和预防作用、增稠性等,其在化妆品领域的应用也日益广泛。商品HA一般为其钠盐,即透明质酸钠(Sodium Hyaluronate,SH)本课题重点研究了化妆品用透明质酸钠的理化、卫生质量标准及相关检验方法。细菌数≤100cfu/g;霉菌及酵母菌数≤50cfu/g;每克供试品中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、粪大肠菌群均不得检出。本研究用营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基分别测定SH的细菌数、霉菌及酵母菌数。同时,用营养肉汤增菌后划线接种于甘露醇氯化钠琼脂的平板上以及血浆凝固酶试验来检测金黄色葡萄球菌。另外,用胆盐乳糖增菌后划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂的平板上以及氧化酶试验、绿脓菌素试验来检测铜绿假单胞菌;用双倍乳糖胆盐培养基在44℃~45℃培养是否产酸产气、伊红美蓝琼脂平板及靛基质试验来检测粪大肠菌群。
参考文献
[1]Hyaluronan:its nature,distribution,functions and turnover[J].J.R.E.Fraser,T.C.Laurent,U.B.G.Laurent.Journal of Internal Medicine.2003(1)
[2]Effects of hyaluronic acid and basic fibroblast growth factor on motility of chondrocytes and synovial cells in culture[J].Sokichi Maniwa,Mitsuo Ochi,Tetsuhisa Motomura,Tetsuya Nishikori,Jun Chen,Hiroyuki Naora.Acta Orthopaedica.2001(3)
[3]Biochemistry of Hyaluronan[J].Torvard C.Laurent.Acta Oto-Laryngologica.1987(S442)
[4]Hyaluronic acid enhances phagocytosis of human monocytes in vitro[J].Tomas Ahlgren,Connie Jarstrand.Journal of Clinical Immunology.1984(3)
[5]曲建全.化妆品用透明质酸钠的质量标准及检验方法研究[D].山东大学,2013.