琼脂糖凝胶2B的应用

2020/4/7 14:01:34

背景及概述[1]

琼脂糖凝胶2B为乳白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。琼脂糖凝胶2B是用2%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒,作为凝胶层析介质使用。

理化指标[1]

应用[1]

本产品为传统的琼脂糖介质,非特异性吸附低,回收率高,可多次重复使用等特点,用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。下面简要介绍介质的使用过程。

1装柱

凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。

(1)让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

(2)选择一根一定直径的柱子,长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。不要剧烈搅动,以免搅坏微球。

(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。

(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。

(5)打开蠕动泵,让缓冲液缓慢流过,使柱床稳定。

(6)用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。

2平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。

3上样

(1)样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。

(2)介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。

(3)上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。

4洗脱

用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

5再生

一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。

6注意

在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。

主要参考资料

[1]琼脂糖凝胶2B使用说明

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