人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)ELISA KIT的应用

2020/7/9 8:57:07

背景[1-3]

人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)水平。用纯化的人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1),再与HRP标记的人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)浓度。载脂蛋白A1是载脂蛋白的一类,载脂蛋白是血浆脂蛋白中的蛋白质部分,能够结合和运输血脂到机体各组织进行代谢及利用的蛋白质。

Apo A1(载脂蛋白A1)是高密度脂蛋白(HDL)的主要结构蛋白,约占HDL颗粒的65%,分子量为28300。在小肠和肝脏合成,少量在肾和性腺合成,通过肾脏降解。po A1逆向转运胆固醇至肝脏,具有抗-动脉粥样硬化作用。APOA1是HDL的主要载脂蛋白,影响其血浆水平同HDL。ApoAI:正常人群血清apoAI水平多在1.2~1.6g/L范围内,女性略高于男性。HDL颗粒的蛋白质成分(载脂蛋白)约占50%,蛋白质中apoAI约占65%~75%,其他脂蛋白极少,所以血清apoAI可以反映HDL水平,与HDL-C呈明显正相关,其临床意义也大体相似。但是,HDL是一系列e79fa5e98193e4b893e5b19e31333366303665颗粒大小与组成不均一的脂蛋白,病理状态下HDL亚组分及其组成成分常会发生变化,故apoAI的升、降也可能与HDL-C变化不完全一致。

应用[4][5]

人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)ELISA KIT用于ABCA1介导载脂蛋白A1调节巨噬细胞炎症反应及其机制研究。

载脂蛋白A1(apolipoproteinA-Ⅰ,apoA-Ⅰ)是血浆高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)的主要成分,参与体内胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT),因此具有抗As的作用。近来研究发现,HDL/apoA-Ⅰ除了参与RCT外,还具有显著的抗炎效应,其机制研究对于明确As的慢性炎症疾病特点及其防治具有重要意义。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)是以ATP为能源,促进细胞内游离胆固醇(free cholesterol,FC)和磷脂流出并转运至贫脂apoA-Ⅰ,从而调节细胞内胆固醇平衡的一种整合膜蛋白。培养THP-1细胞株,用160nmol/L的佛波酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)刺激细胞12h,使其诱导分化为巨噬细胞,并以50mg/L的氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)孵育细胞使其转化为THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞。以HDL(30μg/ml)及其主要成分apoA-Ⅰ(10μg/ml)、载脂蛋白B(apolipoprotein B,apoB)(10μg/ml)、卵磷脂(phosphatidyl-choline,PC)(25μg/ml)和胆固醇(cholesterol,CHO)(50ng/ml)分别预处理细胞3h后,用LPS(10ng/ml)处理细胞6h,采用免疫印迹实验(western blotting)和酶联免疫吸附法(ELISA)法检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化因子1(monocyte chemotactic factor,MCP-1)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)、IL-6和环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达。

参考文献

[1]Monoclonal antibodies targeting IL-1 beta reduce biomarkers of atherosclerosis in vitro and inhibit atherosclerotic plaque formation in Apolipoprotein E-deficient mice[J].Vinay Bhaskar,Johnny Yin,Amer M.Mirza,Dan Phan,Sandra Vanegas,Hassan Issafras,Kristen Michelson,John J.Hunter,Seema S.Kantak.Atherosclerosis.2011(2)

[2]Associations of the ATP-binding cassette transporter A1 R219K polymorphism with HDL-C level and coronary artery disease risk:A meta-analysis[J].Xiang-yu Ma,Jian-ping Liu,Zhi-yuan Song.Atherosclerosis.2011(2)

[3]Neutrophil Activation Is Attenuated by High-Density Lipoprotein and Apolipoprotein A-I in In Vitro and In Vivo Models of Inflammation[J].Andrew J.Murphy,Kevin J.Woollard,Andreas Suhartoyo,Roslynn A.Stirzaker,James Shaw,Dmitri Sviridov,Jaye P.F.Chin-Dusting.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2011(6)

[4]The Evolving Role of HDL in the Treatment of High-Risk Patients with Cardiovascular Disease[J].H.Bryan Brewer.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.2011(5)

[5]尹凯.ABCA1介导载脂蛋白A1调节巨噬细胞炎症反应及其机制[D].南华大学,2012.

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