背景[1-3]
丝裂原活化蛋白激酶P38(抗体)是一类可以特异性结合丝裂原活化蛋白激酶P38的多克隆抗体，主要用于检测丝裂原活化蛋白激酶P38的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。
检测原理：双抗体夹心法测定标本中丝裂原活化蛋白激酶P38水平。用纯化的丝裂原活化蛋白激酶P38抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丝裂原活化蛋白激酶P38，再与HRP标记的丝裂原活化蛋白激酶P38抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的丝裂原活化蛋白激酶P38呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中丝裂原活化蛋白激酶P38浓度。
丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一组能被不同的细胞外刺激，如细胞因子、神经递质、激素、细胞应激及细胞黏附等激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。由于MAPK是培养细胞在受到生长因子等丝裂原刺激时被激活而被鉴定的，因而得名。
所有的真核细胞都能表达MAPK。MAPK通路的基本组成是一种从酵母到人类都保守的三级激酶模式，包括MAPK激酶激酶（MAP kinase kinase kinase，MKKK）、MAPK激酶（MAP kinase kinase，MKK）和MAPK，这三种激酶能依次激活，共同调节着细胞的生长、分化、对环境的应激适应、炎症反应等多种重要的细胞生理/病理过程。
应用[4][5]
用于七鳃鳗丝裂原活化蛋白激酶P38α、β分子的克隆、重组表达及相关免疫学研究
以P38MAPK作为研究对象,探索P38MAPK在七鳃鳗中是否存在,以及在七鳃鳗免疫防御过程中所起的作用。这样不仅可以揭示P38MAPK分子家族从低等到高等脊椎动物的分子进化过程,也为进一步深入了解无颌类脊椎动物免疫应答的分子机制奠定基础。
利用多种生物信息学分析软件对其蛋白一级、二级及三级结构进行了多种分析并构建了系统发育进化树,探讨了P38MAPK家族分子的分子进化机制,为以后实验的设计和实施打下了良好的理论基础。
在成功的克隆了Lja-MAPK14和Lja-MAPK11的基础上,又成功的构建了Lja-MAPK14和Lja-MAPK11的重组表达质粒,并将其转化到表达菌株E.coli BL21中进行了表达。对其可溶性进行检测发现Lja-MAPK14和Lja-MAPK11均以包涵体的形式表达,并且两者皆可利用人源P38的多克隆抗体通过免疫印迹方法进行检测。
为了进一步了解Lja-MAPK14和Lja-MAPK11的功能,通过半定量PCR,实时定量PCR和免疫印迹等方法检测了它们在免疫相关组织中随免疫应答时间变化在mRNA和蛋白水平的表达谱。
利用免疫荧光方法检测了Lja-MAPK14和Lja-MAPK11在类淋巴细胞中的定位。实时定量PCR和免疫印迹的结果表明,混合菌免疫后Lja-MAPK14和Lja-MAPK11在单个核白细胞和髓样小体中都出现了明显的上调现象。
免疫荧光方法检测发现,Lja-MAPK14/Lja-MAPK11(P38MAPK)与VLRB~+淋巴细胞存在共定位现象。同时,P38MAPK在混合菌免疫后还出现了入核的现象。
参考文献
[1]p38 MAP kinases in the heart[J].Tomohiro Yokota,Yibin Wang.Gene.2016(2)
[2]Gene structure,molecular characterization and transcriptional expression of two p38 isoforms(MAPK11 and MAPK14)from rock bream(Oplegnathus fasciatus)[J].Navaneethaiyer Umasuthan,S.D.N.K.Bathige,Jae Koo Noh,Jehee Lee.Fish and Shellfish Immunology.2015(1)
[3]p38 MAPK:stress responses from molecular mechanisms to therapeutics[J].Lydia R.Coulthard,Danielle E.White,Dominic L.Jones,Michael F.McDermott,Susan A.Burchill.Trends in Molecular Medicine.2009(8)
[4]Regulation of JNK and p38 MAPK in the immune system:Signal integration,propagation and termination[J].Gonghua Huang,Lewis Zhichang Shi,Hongbo Chi.Cytokine.2009(3)
[5]张依杉.七鳃鳗丝裂原活化蛋白激酶P38α、β分子的克隆、重组表达及相关免疫学研究[D].辽宁师范大学,2018.