背景[1-3]
T-47D人乳腺管癌细胞分离自一位54岁乳房侵入性导管癌的女性患者胸水；发现分化的上皮亚株(T-47D)有细胞质连接和17-β-雌二醇及其他类固醇降血钙素的受体，T-47D细胞表达WNT7B癌基因。
T-47D人乳腺管癌细胞
培养步骤
培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml胰岛素；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
应用[4][5]
用于藏药毛诃子化学成分及体外抗癌活性的研究
从毛诃子中分离得到;有35个单体化合物为首次从榄仁树属植物中分离得到,且二氢黄酮类和缩合鞣质类为首次从榄仁属植物中分离得到。采用UPLC-MSn液质联用分析毛诃子乙酸乙酯部位和水部位化学成分:ACQUITY UPLC BEH C18（2.1×100 mm,1.7μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱（0-5 min,5%A→15%A;5-10 min,15%A→25%A;10-15 min,25%A→60%A;15-25 min,60%A→90%A;25-30 min,90%A→90%A）,流速0.3mL·min-1,检测波长270 nm和280 nm,柱温30℃。
根据ESI-MS提供的精确分子量、UPLC-MSn产生的MS/MS裂解碎片、各化合物的相对保留时间（tR）、推测的分子式（error<±5 ppm）等信息以及已有文献的报道,共推测出到70个化合物,乙酸乙酯部位推测出48个化合物,水部位推测出22个化合物,其中14个单体化合物分离得到。
另外,总结没食子酸及其酚酸类衍生物、鞣花酸及其酚酸类衍生物、可水解鞣质的质谱解析规律。采用CellTiter-Blue?Cell Viability Assay法,对藏药毛诃子不同极性萃取部位的抗癌活性进行初步评价。选用人乳腺导管癌细胞（ZR 75-1）、人乳腺导管癌细胞（BT-474）、人乳腺癌细胞（MCF-7）、人乳腺癌细胞（T-47D）、人结肠直肠腺癌细胞（Colo-205）、人结肠腺癌细胞（HT-29）、人结肠癌细胞（SW480）、人子宫内膜腺癌细胞（Hec-1-A）、人前列腺癌细胞（LnCap）和人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）10种癌细胞为模型,比较藏药毛诃子不同极性部位的抗癌活性。
结果表明,藏药毛诃子乙酸乙酯萃取部位和水萃取部位抗癌活性较强,乙酸乙酯萃取部位对ZR 75-1、Colo-205、BT-474和T-47D癌细胞的抑制作用最为明显,其半数抑制浓度IC50分别为27.33μg/mL、36.63μg/mL、5 0.67μg/mL和53.47μg/mL;水萃取部位对T-47D和Colo-205癌细胞的抑制作用最为明显,其半数抑制浓度IC50分别为35.98μg/mL和55.17μg/mL。
参考文献
[1]Distribution of Metabolites in Root Barks of Seven Tree Peony Cultivars for Quality Assessment Using NMR-based Metabolomics[J].Pei Wang,Ze-ming Rong,Cui-xia Ma,Xin-feng Zhao,Chao-ni Xiao,Xiao-hui Zheng.Chinese Herbal Medicines.2017(1)
[2]Ellagitannin oligomers and a neolignan from pomegranate arils and their inhibitory effects on the formation of advanced glycation end products[J].Hideyuki Ito,Peng Li,Mayuko Koreishi,Akifumi Nagatomo,Norihisa Nishida,Takashi Yoshida.Food Chemistry.2014
[3]Anti-Helicobacter pylori compounds from the ethanol extracts of Geranium wilfordii[J].Xi-Quan Zhang,Hong-Mei Gu,Xin-Zhu Li,Zhong-Nan Xu,Yu-Sheng Chen,Yang Li.Journal of Ethnopharmacology.2013(1)
[4]TLC Densitometric Methods for Quantification of Gallic Acid in Triphala Churna for Routine Quality Control[J].Vishal Jain,Ambar Vyas,Swarnlata Saraf,S.Saraf.Research Journal of Pharmacy and Technology.2011(2)
[5]李师.藏药毛诃子化学成分及体外抗癌活性的研究[D].北京中医药大学,2018.