背景[1-3]
L-540人霍奇金淋巴瘤细胞系源自７６岁白人男性的左颞叶侧胶质瘤组织，有微绒毛，无桥粒，CD15及CD30抗原表达阳性，不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
霍奇金淋巴瘤（HL）是淋巴瘤的一种独特类型，为青年人中最常见的恶性肿瘤之一。病初发生于一组淋巴结，以颈部淋巴结和锁骨上淋巴结常见，然后扩散到其他淋巴结，晚期可侵犯血管，累及脾、肝、骨髓和消化道等。经典霍奇金淋巴瘤可分为4种组织学类型：淋巴细胞为主型、结节硬化型、混合细胞型和淋巴细胞耗竭型。
L-540人霍奇金淋巴瘤细胞系
病变部位淋巴结等正常淋巴组织结构全部或部分破坏，呈现多种非肿瘤性反应性细胞成分，多为淋巴细胞，并可见浆细胞、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、组织细胞、成纤维细胞及纤维组织。
在多种反应性细胞背景成分中散在数量不等的典型RS细胞及其变异型。典型RS细胞为双核或多核巨细胞，核仁嗜酸性，大而明显，胞质丰富。若细胞表现对称的双核称“镜影细胞”。
RS细胞及不典型（变异型）RS细胞被认为是霍奇金淋巴瘤真正的肿瘤细胞。最近应用单细胞显微技术结合免疫表型和基因型检测，证明RS细胞来源于淋巴细胞，主要来源于B淋巴细胞。经典型霍奇金淋巴瘤的RS细胞CD15及CD30抗原表达阳性，是识别RS细胞的重要免疫标志。
应用[4][5]
用于不同抗原表位CART-30细胞对经典型霍奇金淋巴瘤细胞株的杀伤作用及优化研究
研究选择不同抗原表位的两种单克隆抗体Ki-4及Ber-H2,优化性构建不同的CAR基因片段的载体,比较两种CART细胞对CD30阳性的cHL细胞系L428的杀伤作用,以及其机制与NF-κB信号通路相关性进行研究。
方法:①构建携带不同抗原表位的CD30-CAR基因片段的慢病毒载体;
②两种不同抗原表位的CART-30细胞的培养;
③两种不同抗原表位CART-30细胞对cHL细胞株的杀伤效率的比较;
④CD30-CARs对cHL细胞株NF-κB机制的影响。
结果:①成功构建出不同抗原表位的CD30-CART细胞,阳性率平均值约为65.7%左右;
②Ki-4组效靶比为1:1时杀伤效率的平均值为35.15%,效靶比为10:1时杀伤效率的平均值为66.99%;Ber-H2组效靶比为1:1时杀伤效率的平均值为31.95%,效靶比为10:1时杀伤效率的平均值为56.11%;CD19组效靶比为1:1时杀伤效率的平均值为21.92%,效靶比为10:1时杀伤效率的平均值为45.49%;CIK组效靶比为1:1时杀伤效率的平均值为16.99%,效靶比为10:1时杀伤效率的平均值为32.22%。P<0.05,不同效应细胞间及不同效靶比间的杀伤效应均有差异,且此差异具有统计学意义。
③Western蛋白印迹法结果示:TNF-α组及Ki-42h及3h组P-P65呈强阳性,IκBα蛋白呈弱阳性;而空白对照组、Ki-4的Oh组及Ber-H2各组P-P65及IκBα蛋白均呈现弱阳性。
结论:①不同抗原表位的CD30-CART细胞对经典型霍奇金淋巴瘤细胞杀伤作用不同;
②Ki-4的scFv能有效激活NF-κB信号通路,但Ber-H2-CARs不能激活NF-κB信号通路。
参考文献
[1]Clinical Immunotherapy of B-Cell Malignancy Using CD19-Targeted CAR T-Cells[J].John Maher.Current Gene Therapy.2014(1)
[2]Houttuynia cordata Thunb inhibits the production of pro?inflammatorycytokines through inhibition of the NFκB signaling pathway in HMC?1 human mastcells[J].Hee Lee,Hye?Sook Seo,Gyung?Jun Kim,Chan Jeon,Jong Park,Bo?Hyoung Jang,Sun?Ju Park,Yong?Cheol Shin,Seong?Gyu Ko.Molecular Medicine Reports.2013(3)
[3]Hodgkin lymphoma:2012 update on diagnosis,risk‐stratification,and management[J].Stephen M.Ansell.Am.J.Hematol..2012(12)
[4]Role of disorder in IκB–NFκB interaction[J].H.JaneDyson,Elizabeth A.Komives.IUBMB Life.2012(6)
[5]邹丹丹.不同抗原表位CART-30细胞对经典型霍奇金淋巴瘤细胞株的杀伤作用及优化研究[D].中国人民解放军医学院,2017.