背景及概述[1]
间苯三酚（1,3,5-三羟基苯）是一种重要的精细化工产品，主要用于药物合成的中间体，例如黄酮类化合物。作为治疗心脑血管病的药物，黄酮类化合物愈来愈受到药物学家的重视。
制备[1-2]
报道一、
a、溴化反应：以间苯二酚为原料，首先将间苯二酚加入反应容器中，然后加入氯仿进行溶解，溶解后将N-溴代丁二酰亚胺溶于氯仿中得到的N-溴代丁二酰亚胺溶液滴加到反应容器中，N-溴代丁二酰亚胺溶液滴加时间为30min，滴加完后升温至60℃，在此温度条件下反应1h，反应后得到反应液，将所得反应液常压蒸出氯仿，蒸出氯仿后所得液体进行减压蒸馏，在真空度0.098MPa下收集150～160℃馏分，将所得馏分冷却至常温，得到4-溴间苯二酚；
所述间苯二酚与氯仿二者之间加入量的比例为每克间苯二酚加入氯仿2mL，所述N-溴代丁二酰亚胺与氯仿之间加入量的比例为每克N-溴代丁二酰亚胺加入氯仿0.9mL，所述间苯二酚与N-溴代丁二酰亚胺二者之间的质量比为1:1.7；
b、水解反应：将步骤a得到的4-溴间苯二酚加入反应容器中，然后加入二甲苯、氢氧化钾和催化剂铜，升温至140℃条件下回流反应6h；反应后将反应产物冷却至60℃以下，并加入水搅拌降温至室温，过滤除去催化剂铜，过滤后得到的反应液静置分层，分层后取水相，得到间苯三酚钾盐溶液；
所述4-溴间苯二酚与二甲苯二者之间的加入量为每克4-溴间苯二酚加入二甲苯1.35mL，所述4-溴间苯二酚与氢氧化钾之间加入的质量比为1:1.06，所述4-溴间苯二酚与催化剂铜二者之间的质量比为21:1；
c、酸化反应：将步骤b得到的间苯三酚钾盐溶液加入反应容器中，在搅拌条件下采用浓度为0.6mol/L的盐酸调节其pH值为1～3，在此条件下析出固体，固体析出结束后进行过滤，得到固体间苯三酚粗品；
d、粗品提纯：将步骤c所得间苯三酚粗品加入反应容器中，并加入水加热至90～100℃进行充分溶解，所述水的加入量为间苯三酚粗品质量的4倍，溶解后加入活性炭回流脱色30min，活性炭的加入量占间苯三酚粗品质量的3.6%，脱色后在90～100℃条件下进行热过滤，所得滤液自然冷却析晶，析晶结束后过滤，所得产品采用纯化水冲洗，冲洗后进行干燥，干燥温度为50℃，干燥时间为5h，干燥后得到间苯三酚。所得产品的纯度为99.9%，其收率为73.2%。
报道二、
生物催化合成间苯三酚的方法步骤是：
(一)抗间苯三酚突变株的筛选
将菌体稀释到一定浓度，然后取菌液加入NaNO2溶液和HAC‑NaAC缓冲液的混合液中，在37℃左右水浴振荡培养。分别加入到Na2HPO4缓冲溶液混匀，并涂在含LiCl的平板上，37℃左右避光培养。
(二)phlD1基因克隆及重组菌株的获得
提取细菌Pseudomonas fluorescens Pf‑5基因组DNA，PCR扩增获得多聚酮合成酶基因(phlD)；再利用定点突变方法获得变异基因phlD1，胶回收试剂盒回收目的片段，相应的限制性内切酶酶切目的片段，37℃左右，3‑4小时，乙醇沉淀纯化目的片断；用相同的限制性内切酶酶切原核表达载体pET‑30a(+)，胶回收试剂盒回收纯化；载体与外源片段按摩尔比1∶3‑10的比例，16℃左右连接过夜，即为构建好的原核表达载体pET‑phlD1；将构建好的重组质粒42℃热击转化到抗间苯三酚大肠杆菌中，经酶切鉴定、PCR鉴定和测序筛选获得阳性重组菌株；‑80℃左右保存该菌株。
(三)工程大肠杆菌诱导表达
将工程菌接种到LB液体培养液中(内含30‑50μg·mL‑1的卡那霉素)，37℃左右振荡培养至OD600约为0.4‑0.6时，在菌液中加入诱导剂IPTG，继 续在37℃左右培养3‑5小时，诱导表达目的蛋白；取出诱导后的培养液，取沉淀用磷酸缓冲液洗涤，按1:10的比例(w/v)再用此缓冲液重悬细胞，加入2×SDS‑PAGE上样缓冲液，煮沸，SDS‑PAGE电泳检测，即可检测到表达的相应融合蛋白条带。
(四)间苯三酚的发酵
配制发酵培养基，灭菌，冷却时进行无菌接种。按照正交实验优化结果，培养基初始，并通过温度电极和pH电极感应，自动调节发酵液的温度和pH，搅拌发酵培养。
(五)间苯三酚的提取
发酵上清液中的间苯三酚，经乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯并减压浓缩，制得间苯三酚。
参考文献
[1] [中国发明,中国发明授权] CN201310622931.0 间苯三酚的制备方法
[2] [中国发明,中国发明授权] CN200810225401.1 微生物催化合成间苯三酚