水飞蓟素的制备方法

2021/9/8 9:11:34

背景及概述[1]

水飞蓟素具有抗肝中毒、保护肝细胞膜、改善肝功能的药理活性,临床用于治疗肝炎、 胆囊炎等。近年来研究发现,水飞蓟素不仅具有保肝利胆作用,而且还具有明显的抗脂质过 氧化、抗辐射、清除自由基和抗胃溃疡等作用,并且毒性小、无致畸和诱变作用,在降血脂、 防治动脉粥样硬化、预防脑缺血和抗血小板聚集等方面具有较好的效果,水飞蓟素很有可能 成为防治心脑血管疾病的良好药物。

制备[1-2]

报道一、

a、选择籽粒饱满的水飞蓟籽,清洗烘干,用机械轧油机采用三 级压榨法进行压榨,100斤水飞蓟籽可压榨出15斤油,压榨后的粕进 行粗粉,备用;

b、投料,每罐投入1.5吨粗粉后的水飞蓟粕,按1∶4的比例加入 丙酮,即1吨水飞蓟粕加入4吨丙酮,用提取罐和浓缩罐进行物料回流 提取10小时,物料温度控制在25度,同时用冷凝器回收丙酮溶剂;

c、将溶剂过滤,浓缩2小时,温度60度,蒸气压力1.5兆帕, 同时用冷凝器回收丙酮溶剂,得到糊状浸膏;

d、将浸膏放到夹套锅内,加入1∶5的净化纯净水,即1公斤浸 膏加入5公斤水,水温加热到80度,搅拌1小时,放掉水,这样反 复重复6次;

e、将水飞蓟浸膏放到真空干燥罐内,进行真空干燥,干燥温度 120度,负压0.8兆帕,连续进行4‑6小时,得到含水量在5%左右 的水飞蓟素的干粉块,将其粉碎成80‑90目;

f、再将粉碎后的水飞蓟素放入真空罐中进行二次真空,干燥2 ‑4小时,温度80度,负压0.8兆帕,即得水飞蓟素干粉。

报道二、

1.复合微生物发酵剂冻干粉的制备过程

1.1原菌种活化

分别量取0.9%的生理盐水10ml于2只试管内,经121℃灭菌20分钟冷却至28℃,将2 株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中,震荡使其溶解,在28 ℃恒温箱中静止活化30分钟,备用。

1.2发酵菌扩大培养

1.2.1母发酵剂的制备

分别量取2株菌培养基各200ml于2只500ml三角瓶内,121℃灭菌20分钟冷却至28℃, 按培养基体积的10%接种1.1步骤中已经活化的菌种,在28℃、摇床转速150转/分钟条件下 摇床培养24小时,作为母发酵剂。

1.2.2生产发酵剂的制备

首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液,分装于2只500mL三角瓶内,每瓶 200mL,121℃灭菌20分钟冷却至28℃,分别按2%体积比例接种母发酵剂,28℃、摇床转速 150转/分钟条件下摇床培养48‑52小时,检测2株菌发酵液活菌数,各发酵液活菌数≥109 个/ml,视同为发酵成熟,如果活菌数<109个/ml,继续培养,直至达到109个/ml。

1.3粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中,液面高度低于1cm,加盖瓶塞后放 入‑30℃冰柜速冻,冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装,放入冻干机进行冷冻干燥,制备粉末冻干 菌种。

1.4复合微生物发酵剂冻干粉的制备

按各粉末冻干菌种重量,取A菌粉末3份,B菌粉末2份,充分混匀后制成复合微生物 发酵剂冻干粉。

2.水飞蓟素的制备

2.1水飞蓟种子预处理

取水飞蓟种子经机械粉碎后,用螺旋式榨油机榨油,得去油种子饼粉,加水调整去油种 子饼粉水分含量为40%~45%,按湿去油种子饼粉重量的4.2%~4.8%添加蔗糖,充分混匀后, 121℃灭菌20分钟冷却至28℃,制成发酵培养基,备用。

2.2复合微生物发酵剂冻干粉活化

首先配制质量百分比浓度为2%的葡萄糖溶液1千克,取5克复合微生物发酵剂冻干粉, 25℃~28℃条件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中,制成复合微生物菌悬液,静止状态下活 化30分钟。

2.3发酵

将经过2.2步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克,均匀接种在10千克经过2.1步骤预 处理的发酵培养基上,然后将接种后的发酵培养基平摊在无菌盘中,培养基厚度12cm~15cm, 25℃~28℃条件下保温发酵60小时。

2.4干燥

将经过2.3步骤发酵处理的培养基75℃~80℃热风干燥,边干燥边搅拌,使发酵后的培 养基水分含量低于5%。

2.5提取

将2.4步骤处理的物料超微粉碎,过100目筛,按重量体积比为1g∶15mL的比例取过筛 后的粉末加入无水乙醇,在15℃~20℃、真空度为‑0.1MPa条件下提取10h,膜分离后取上 清液减压蒸馏回收乙醇,得黄色粉末状物质,按1g∶5mL的比例加甲醇溶解,经过滤后取不溶物真空干燥,得水飞蓟素。

参考文献

[1] [中国发明] CN201010600010.0 一种低溶残高含量水飞蓟素的加工提取方法

[2] [中国发明] CN201210062208.7 一种水飞蓟素的制备方法

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