背景及概述[1]
朝藿定B(Epimedin B，缩写为EpiB)是淫羊藿提取物淫羊藿总黄酮中含量第二高的活性成分，文献显示在动物实验、细胞实验中，朝藿定B具有抗骨质疏松、骨保护作用。淫羊藿亦名仙灵脾，味甘气香，性温不寒，能益精气，具有补肾壮阳、止咳平喘、益气强心等功效，对防止衰老、健忘也有一定效果。临床中用于治疗神经衰弱、老年慢性支气管炎、肺气肿、冠心病、更年期高血压、血液病等。
含量测定[1]
(1)对照品溶液的制备：朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷各约5mg，精密称 定，分别置于5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，配制成4种对照品储备液。分别精密量 取4种黄酮对照品储备液适量，置10ml量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，得混合对照品储 备液。
(2)内标溶液的制备：取柚皮苷对照品约10mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加甲醇 溶解并稀释至刻度，配制成内标储备液。精密量取内标储备液适量，置10ml量瓶中，加入乙 腈:0.1％甲酸水溶液(35:65)稀释至刻度，摇匀，得100μg/ml内标次级储备溶液。精密吸取 内标次级储备液200μl，置10ml量瓶中，加乙腈:0.1％甲酸水溶液(35:65)稀释至刻度，摇 匀，得到内标工作液(2μg/ml)。
(3)供试品溶液制备：用乙腈:0.1％甲酸水溶液(35:65)稀释喘可治注射液2000 倍，精密量取1000μl加内标工作液200μl，涡旋40s，过0.22μm滤膜，取续滤液，得供试品溶 液。
(4)检测条件：
高效液相色谱条件
色谱柱C18150×2.1mm,5.0μm、流动相乙腈:0.1％甲酸水溶液35:65、等度洗脱 3.5min、进样量10μl、柱温40℃、流速0.22ml/min；
质谱条件
辅助气化电喷雾离子源ESI；多反应离子监测MRM模式负离子检测，监测离子对分 别为：m/z883.4→675.2朝藿定A，m/z853.5→645.3朝藿定B，m/z867.4→659.4朝藿定C， m/z721.3→513.2淫羊藿苷，m/z579.2→271.1柚皮苷，辅助气化气流量：7500CC/min，雾 化气流量：8L/min，气帘气流量：6L/min，离子源喷雾电压：-4000V，离子源雾化温度：350℃。
分别取对照品、内标溶液和供试品溶液按照上述检测条件，测定朝藿定A、朝藿定 B、朝藿定C和淫羊藿苷含量分别为66.11μg/ml，84.37μg/ml，724.5μg/ml，160.6μg/ml。
参考文献
[1] [中国发明,中国发明授权] CN201410778188.2 一种喘可治注射液4种黄酮类有效成分检测方法