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D-葡萄糖-6-磷酸二钠在生化研究中的应用

发布日期:2019/1/2 14:57:15

背景及概述[1][2]

D-葡萄糖-6-磷酸二钠是一种有机物质,其主要用于生化研究,测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶的底物。如果吸入D-葡萄糖-6-磷酸二钠,请将患者移到新鲜空气处;如果皮肤接触,应脱去污染的衣着,用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤,如有不适感,就医;如果眼晴接触,应分开眼睑,用流动清水或生理盐水冲洗,并立即就医;如果食入,立即漱口,禁止催吐,应立即就医。对保护施救者的忠告如下:将患者转移到安全的场所,咨询医生,如果条件允许请出示此化学品安全技术说明书给到现场的医生看。若泄露,小量泄漏尽可能将泄漏液体收集在可密闭的容器中,用沙土、活性炭或其它惰性材料吸收,并转移至安全场所,禁止冲入下水道;若大量泄漏,构筑围堤或挖坑收容,封闭排水管道,用泡沫覆盖,抑制蒸发,用防爆泵转移至槽车或专用收集器内,回收或运至废物处理场所处置。

结构

应用[1-2]

D-葡萄糖-6-磷酸二钠主要用于生化研究。

测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶的底物。其应用举例如下:

1.用于表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定。表小檗碱是黄连中一种重要的异喹啉类生物碱。研究表明表小檗碱具有较强的抗氧化活性,能够抑制醛糖还原酶,降血糖,对抗糖尿病潜在并发,其作用强于小檗碱。检测过程中所使用的D-葡萄糖-6-磷酸二钠 和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶均购于北京拜耳迪生物技术有限公司( Sigma 公司分装)。D-葡萄糖-6-磷酸二钠主要用于检测过程中探针药物肝微粒体温孵:将各探针药物与RLM 37 ℃ 水浴中预温孵 5 min,加入 NADPH 发 生系统( 终浓度含 1 mmol/L NADPNa2,20 mmol /LD-葡萄糖-6-磷酸二钠(G-6-P),2 U /L G-6-PDH,20 mmol/L  MgCl2 ) ,用 0.15 mol/L的 KCl 缓冲液( pH 7.4) 定容使整个温孵体系终体积为 0.4 mL( 含有美托洛尔 20 μmol/L、氨苯砜25 μmol/L、非那西丁 25 μmol/L、氯唑沙宗 25 μmol/L、甲苯磺丁脲 25 μmol/L ) 和 1 g/L蛋白,于37 ℃水浴中均匀振荡40 min。取出体外温孵样品放入冰浴中,按1∶ 3 加入冰冷的甲醇终止反应,同时加入内标物 0.06 g/L五味子醇甲20 μL,振摇 30 s,于 4 ℃,1 万× g 离心 20 min。吸取上清夜氮气吹干,甲醇( 400 μL) 复容,4 ℃,1 万× g,离心20 min,取上清进样20 μL,进行 HPLC 分析,每个样本均做3 个重复。

2. 用于测定吴茱萸次碱对 5 种黄连生物碱大鼠体外肝代谢的抑制作用。

黄连和吴茱萸配伍使用已有悠久历史,二药一寒一热,相反相成。黄连主要成分为异喹啉型生物碱,包括黄连碱(COP)、表小檗碱(EPI)、小檗 碱(BER)、巴马汀(PAL)、药根碱(JAT)等,吴茱萸次碱(RUT)为吴茱萸的主要成分。近年来的 研究发现,黄连与吴茱萸成分间存在明显的药动学相互作用。黄连生物碱主要在肝脏代谢,吴茱萸成分中的 RUT 能选择性抑制大鼠和人肝微粒体 酶的活性,吴茱萸成分对 BER 的大鼠肝代谢具 有抑制作用。由于不同黄连生物碱存在明显肠吸收的选择性,因此推测吴茱萸对黄连各生物碱肝代 谢应存在抑制作用并具有选择性。有实验采用大鼠体外肝微粒体温孵代谢模型,通过获得半数抑制浓度(IC50)及抑制常数(Ki)值,判断 RUT 对黄连中 5 种生物碱成分(COP、EPI、BER、PAL、JAT)是否具有体外代谢性抑制 作用及强弱程度,比较 RUT 对这 5 种生物碱抑制作 用的差异性。D-葡萄糖-6-磷酸二钠(G-6-P)主要用于检测过程中NADPH-发生系统的制备:精密称取 NADPNa2、G-6-P、G-6-PDH、MgCl2 适量,加水定量溶解,即得含 2 mmol/L NADPNa2、 20 mmol/L G-6-P、4 U/L G-6-PDH、40 mmol/L MgCl2 的 NADPH-发生系统。

主要参考资料

[1] 杨晓燕, 叶静, 孙桂霞, 等. 表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对 CYP2D6 酶活性的抑制作用[J]. 中国中药杂志, 2014, 39(19): 3855-3859.

[2] 薛宝娟, 李志慧, 张玉杰, 等. 吴茱萸次碱对 5 种黄连生物碱大鼠体外肝代谢的抑制作用[D]. , 2014.

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