中性红的染色原理与应用

2022/5/23 10:50:19

中性红(Neutral red),是一种活细胞及测定酸碱度的一种指示剂。分子式:C15H17ClN4,分子量:288.7753,深绿色结晶粉末。易溶于水和醇,水溶液呈红色,醇溶液为黄色。

中性红染色原理

中性红是一种弱碱性 pH 指示剂,变色范围 pH6.4~8.0之间(由红变黄)。也是一个弱阳离子的分子。其溶液用于染细胞中的液泡(主要是植物细胞),可鉴定细胞死活.活细胞被染成红色,而死细胞不变色。与台盼蓝相反。它也可以用于动物细胞活细胞活性的检测。做病毒相关实验的人都知道,在做病毒的空斑实验时,最后需要用到中性红染色,数那种不是红红的、空白的小孔作为空斑。

应用范围

中性红实验检测细胞活性或毒力检测应用范围是非常广的。下面是我列举的12种可以用到它的方面。大家可以评估一下自己是否可以用到。

Viral cytopathogenicity and treatment effectiveness

Estimation of cytotoxic T-lymphocyte populations

Ab-dependent complement cell damage (Filman)

Tumoral cell growth and chemotherapy effectiveness

Toxicity of physical agents either alone or in combination with

chemicals, and, in particular, phototoxicity

Determination of toxins in biological and environmental samples and in

biotechnological products

Ranking chemicals according to their toxic potencies or hazard

Identification of organ- and cell-specific toxicity

Comparison of species toxicity

Establishment of chemical structure–toxicity relationships

Elucidation of antagonistic/synergistic interactions between chemicals

Toxicity prevention and treatment effectiveness

The investigation of metabolism-mediated cytotoxicity (detoxication

and toxification process)

The study of temperature-dependent toxicity

各个组织中性红染色的图片(来源于网络)

各个组织中性红染色的图片

排均为正常的细胞,第二排是SY5Y细胞在不同浓度zinc chloride处理下的细胞样子及中性红分布情况。

活细胞中染色原理

我们可以看出在正常的细胞中,会出现胞浆大部分呈淡粉色,其中有蓝色的泡状东西,还有深红色的类似于铁锈状的东西,为什么呢?

首先,中性红是一个弱阳离子的分子(也就是高中的有机化学,为什么弱碱性的分子是一个弱阳离子的分子),可以通过被动运输的分子扩散方式穿过细胞膜,进入到细胞中然后在溶酶体中聚集。

其次,因为是一种被动运输方式,那中性红的吸收必须依赖于细胞产生ATP维持pH梯度的能力。在生理pH值下,染料呈现接近于零的净电荷,使其能够穿透细胞膜。

再次,那它为什么会在溶酶体中聚集呢?溶酶体是一个酸性的液泡状结构,基质中包含很多阴离子(高中有机化学)。中性红会通过非静电模式与溶酶体基质中的阴离子相结合,因此染料带电并保留在溶酶体内。

来源:果子学生信

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中性红的制备 2020/04/26