背景[1-3]
大鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA试剂盒用于血清，血浆，组织匀浆和其他生物液体中胰高血糖素样肽1(GLP1)的定性或定量检测。
测定原理：该试剂盒基于ELISA检测方法，试剂盒中提供的微量滴定板已用胰高血糖素样肽1(GLP1)预涂。在反应过程中，样品或标准品中的胰高血糖素样肽1(GLP1)与胰高血糖素样肽1(GLP1)特异性生物素化检测抗体上固定相载体上固定量的胰高血糖素样肽1(GLP1)竞争。从板中洗涤过量的缀合物和未结合的样品或标准品，并将HRP-链霉亲和素（SABC）加入每个微孔板并孵育。然后将TMB底物溶液加入每个孔中。通过加入硫酸溶液终止酶-底物反应，并在450nm的波长下用分光光度法测定颜色变化。然后通过将样品的O D与标准曲线进行比较来确定样品中胰高血糖素样肽1(GLP1)的浓度。
大鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA试剂盒
样品收集和储存：
收集后立即隔离测试样品，然后立即（2小时内）分析。或等分并储存在-20°C长期。避免多次冻融循环。
1.血清：将全血样品在室温放置2小时或放置在4℃过夜，并以约1000×g离心20分钟，收集上清液，立即进行测定。采血管应为一次性，非致热原和非内毒素。
2. 血浆：使用EDTA-Na2作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内，以2×8℃在1000×g离心样品15分钟。收集上清液并立即进行测定。避免溶血，高胆固醇样本。
3. 培养上清液：在2-8℃下以1000×g离心上清液20分钟以除去不溶性杂质和细胞碎片。收集清除上清液，立即进行检测。
4. 其他生物液体：以2-8℃的1000×g离心样品20分钟。收集上清液并立即进行测定。
操作步骤：
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于胃转流术对2型糖尿病大鼠血浆胰高血糖素样肽-1及骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白-4表达的影响研究
观察胃转流术（RYGB）对自发性2型糖尿病大鼠（GK大鼠）血浆中胰高血糖素样肽-1（GLP-1）和骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白-4（GLUT-4）表达影响,探讨其改善胰岛素抵抗的机制。
方法:选取30只雄性GK大鼠。随机分为三组,分别为手术组、假手术组和饮食控制组,每组大鼠各10只。同时,选取我院动物实验中心的Wistar大鼠10只作为空白对照组。手术组采用胃转流手术的方式进行手术。假手术组仅进行开腹探查,不进行手术。饮食控制组的大鼠不给予手术和药物治疗,仅从饮食和运动上进行控制。空白对照组不进行任何处理。检测和比较各组大鼠术前及术后4周血浆中GLP-1的水平。4周后处死大鼠取大鼠后腿骨骼肌进行检测。使用RT-PCR实验方法对大鼠骨骼肌组织中GLUT-4的m RNA的表达进行检测。
结果:术后4周手术组、假手术组、控制饮食组、空白对照组的大鼠的GLP-1分别为30.42±5.33 umol/L、6.98±0.32 umol/L、7.33±0.65umol/L、29.65±3.76 umol/L,手术组术前GLP-1水平6.98±0.73 umol/L。手术组术后4周同术前比较P<0.05。术后4周时间点手术组同假手术组、控制饮食组比较P<0.05。术后4周手术组、假手术组、控制饮食组、空白对照组的大鼠的GLUT-4的m RNA表达分别为1.81±0.11、1.19±0.14、1.18±0.08、1.18±0.08,术后4周时间点手术组同假手术组、控制饮食组比较P<0.05。术后四周时间点手术组大鼠的GLP-1、GLUT-4的m RNA与空白对照组比较差异无统计学意义,P>0.05。
结论:1.胃转流手术术后GK大鼠血浆中GLP-1水平显著提高。2.胃转流术术后GK大鼠骨骼肌中GLUT-4m RNA表达增加,大鼠胰岛素抵抗症状缓解。
参考文献
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[2]Weight and Type 2 Diabetes after Bariatric Surgery:Systematic Review and Meta-analysis[J].Henry Buchwald,Rhonda Estok,Kyle Fahrbach,Deirdre Banel,Michael D.Jensen,Walter J.Pories,John P.Bantle,Isabella Sledge.The American Journal of Medicine.2009(3)
[3]Administration of Acylated Ghrelin Reduces Insulin Sensitivity,Whereas the Combination of Acylated Plus Unacylated Ghrelin Strongly Improves Insulin Sensitivity[J].C Gauna,F M.Meyler,J A.M.J.L.Janssen,P J.D.Delhanty,T Abribat,P van Koetsveld,L J.Hofland,F Broglio,E Ghigo,A J.van der Lely.The Journal of Clinical Endocrinology＆Metabolism.2004(10)
[4]The clinical effectiveness and cost-effectiveness of bariatric（weight loss）surgery for obesity:a systematic review and economic evaluation.J.Picot,J.Jones,J.Colquitt et al.Health Technology.2009
[5]李继南.胃转流术对2型糖尿病大鼠血浆胰高血糖素样肽-1及骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白-4表达的影响[D].遵义医学院,2016.