背景[1-3]
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2抗体是一类可以特异性结合2'-5'-寡腺苷酸合成酶2的多克隆抗体，主要用于体外检测2'-5'-寡腺苷酸合成酶2的免疫学实验。
2'-5'-寡腺苷酸合成酶是抗病毒酶，它通过降解病毒和宿主RNA来抵消病毒攻击。在分子生物学中，2'-5'-寡腺苷酸合成酶是抗病毒酶，它通过降解病毒和宿主RNA来抵消病毒攻击。该酶在2'-特异性核苷酸转移反应中使用ATP来合成2'-5'-寡腺苷酸，激活潜伏的核糖核酸酶（RNASEL），导致病毒RNA的降解和病毒复制的抑制。
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2是以ATP为底物，在双链RNA的激活下合成以2′，5′-磷酸二酯键连接寡腺苷酸(2~5 A)的酶。寡腺苷酸可以与核糖核酸酶L结合使之被激活，降解RNA，从而抑制蛋白质的合成。该酶在干扰素诱导下形成，因而是干扰素抗病毒和抗肿瘤过程中的一个关键酶。
该酶在2'-特异性核苷酸转移反应中使用ATP来合成2'-5'-寡腺苷酸，激活潜伏的核糖核酸酶（RNASEL），导致病毒RNA的降解和病毒复制的抑制。干扰素作用于靶细胞膜表面的受体后,通过信号转导系统诱导一系列抗病毒蛋白产生,干扰病毒复制以达到抗病毒目的。2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(2'-5'oligoadenylate synthetase,OAS)是干扰素作用于细胞后产生的一种重要的抗病毒蛋白,几十年来,国内外学者对OAS家族及其抗病毒机制进行了大量研究并取得了一定的进展,OAS被dsRNA激活后,催化生成2-5A,2-5A激活核酸内切酶RNase L,降解病毒RNA,阻断病毒蛋白合成,从而发挥抗病毒作用。
应用[4][5]
用于2’,5’-寡腺苷酸合成酶2（OAS2）在寨卡病毒复制中的影响及其机制研究
1.ZIKV感染对OAS2表达的影响;2.ZIKV感染诱导OAS2高表达的机制研究;3.OAS2对ZIKV复制的影响;4.OAS2通过激活Ⅰ型干扰素信号通路抑制ZIKV复制的机制研究。
研究方法:1.ZIKV感染A549,Huh7.0,Huh7.5.1,U5A和2fTGH细胞,检测病毒感染前后OAS2表达;通过比较Huh7.0与Huh7.5.1细胞感染ZIKV后OAS2表达的变化,探究ZIKV诱导OAS2高表达是否通过RIG-Ⅰ介导的通路;通过对比U5A和2fTGH细胞感染ZIKV后OAS2表达的改变,探究ZIKV诱导OAS2高表达是否通过Ⅰ型干扰素介导的通路;
2.ZIKV感染A549细胞,高表达OAS2,检测OAS2对ZIKV复制以及对IFNβ抗病毒活性的影响;
3.ZIKV感染A549细胞,高表达OAS2,检测OAS2对Ⅰ型干扰素及其上游RIG-Ⅰ通路的影响;
4.ZIKV感染A549细胞,高表达OAS2,通过Western Blot检测信号转导和转录因子（STAT1）磷酸化;通过双荧光报告实验检测干扰素刺激反应原件（ISRE）的活性;通过qRT-PCR检测ISGs的表达情况;5.ZIKV感染A549,U5A,2fTGH以及敲低RIG-Ⅰ的A549细胞,高表达OAS2,检测OAS2对ZIKV复制的影响是否依赖于Ⅰ型干扰素信号通路。
研究结果:1.ZIKV感染A549细胞,细胞内OAS2的表达水平显著升高;将A549细胞中RIG-Ⅰ敲低后,ZIKV诱导的OAS2显著降低;高表达RIG-Ⅰ的A549细胞中,ZIKV诱导的OAS2显著增加;
2. 在RIG-Ⅰ受体缺陷的Huh7.5.1细胞中,OAS2的表达降低;将RIG-Ⅰ高表达后,OAS2的表达升高。ZIKV感染2fTGH和U5A细胞,OAS2在两种细胞中均能表达,但是,OAS2在2fTGH细胞中的表达水平显著高于U5A细胞;
3. 感染ZIKV的A549和2fTGH细胞中,OAS2高表达显著抑制ZIKV复制,并且增强IFNβ的抗病毒活性。但是在干扰素受体缺陷的U5A细胞中,OAS2高表达对ZIKV复制无影响;
4. OAS2高表达激活RIG-Ⅰ通路促进IFNβ的产生;
5. OAS2高表达激活了Jak/STAT信号通路,促进STAT1水平的磷酸化,增强ISRE的活性,诱导其它ISGs的表达;
6.敲低A549细胞中的RIG-Ⅰ,高表达OAS2对ZIKV复制无影响。研究结论:OAS2在ZIKV复制中起着重要的调节作用。ZIKV感染后通过RIG-Ⅰ依赖的通路诱导OAS2高表达,且这种诱导作用不完全依赖于Ⅰ型干扰素信号通路;OAS2高表达通过促进IFNβ产生以及激活Ⅰ型干扰素信号通路抑制ZIKV复制且增强IFNβ的抗病毒活性。
参考文献
[1]Infection with a Brazilian isolate of Zika virus generates RIG‐I stimulatory RNA and the viral NS5 protein blocks type I IFN induction and signaling[J].Jonny Hertzog,Antonio Gregorio Dias Junior,Rachel E.Rigby,Claire L.Donald,Alice Mayer,Erdinc Sezgin,Chaojun Song,Boquan Jin,Philip Hublitz,Christian Eggeling,Alain Kohl,Jan Rehwinkel.European Journal of Immunology.2018(7)
[2]RIG-I Recognizes the 5′Region of Dengue and Zika Virus Genomes[J].Maxime Chazal,Guillaume Beauclair,Ségolène Gracias,Valérie Najburg,Etienne Simon-Lorière,Frédéric Tangy,Anastassia V.Komarova,Nolwenn Jouvenet.Cell Reports.2018(2)
[3]IFN‐free therapy is associated with restoration of type I IFN response in HIV‐1 patients with acute HCV infection who achieve SVR[J].C.Carlton‐Smith,J.A.Holmes,S.Naggie,A.Lidofsky,G.M.Lauer,A.Y.Kim,R.T.Chung.Journal of Viral Hepatitis.2018(5)
[4]Mycobacterium tuberculosis ESAT6 induces IFN-βgene expression in Macrophages via TLRs-mediated signaling[J].Ah-Ra Jang,Joo-Hee Choi,Sung Jae Shin,Jong-Hwan Park.Cytokine.2018
[5]廖鑫忠.2',5'-寡腺苷酸合成酶2（OAS2）在寨卡病毒复制中的影响及其机制研究[D].北京协和医学院,2019.