背景[1-3]
甲型流感病毒血凝素抗体是一类可以特异性结合甲型流感病毒血凝素的多克隆抗体，主要用于体外检测甲型流感病毒血凝素的免疫学实验。
流感血凝素是一种可在流行性感冒病毒表面找到的血球凝集素，这类血凝素属于抗原性糖蛋白，可使病毒捆绑在受感染的细胞上。
甲型流感病毒血凝素
甲型流感病毒是一种由脂质分子包覆的球状病毒,在病毒的表面分布有血凝素(hemagglutinin,简称HA蛋白)和神经氨酸酶(neuraminidase,简称NA蛋白)两种蛋白质。一般认为,在流感病毒进入宿主细胞时,HA蛋白的功能是与细胞表面的唾液酸连接,使病毒粘连在宿主表面并随着内吞作用进入宿主体内,在完成新病毒繁殖后,NA蛋白则负责将新病毒从宿主细胞释放。
流感病毒属于正黏病毒科，为RNA病毒，病毒表面有一层脂质包膜，膜上有糖蛋白突起，有血凝素和神经氨酸酶构成。根据核蛋白抗原性不同，可将流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒极易发生变异，主要是凝血素H和神经氨酸酶N的变异。甲型流感病毒H有15种，N有9种，根据抗原变异的大小，人体的免疫能力对变异的新病毒可完全无效或部分无效，从而引起流感流行。
甲型流感对人类致病性高，曾多次引起世界性大流行。甲型流感病毒中发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：甲型H1N1、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N8。其中H1、H5、H7亚型为高致病性，H1N1、H5N1、H7N9尤为值得关注。
应用[4][5]
甲型流感病毒血凝素抗体可以用于可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及初步鉴定
新型甲型H1N1流感病毒是威胁人类健康的重要新发传染病,虽然已有可用于该病毒预防和治疗的疫苗及药物,但现有的神经氨酸酶抑制剂类抗病毒药物和以传统方法制备的流感病毒裂解疫苗均存在一定的局限性。近期研究表明,以重组腺病毒制备流感疫苗具有明显的优越性。
本研究以全基因合成的方法获得甲型H1N1流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因,并以辅助病毒依赖型腺病毒(Helper-dependent adenoviral vector,HDAd)载体系统为基础,构建可表达HA的重组HDAd,为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。
方法：根据GenBank上登录的甲流H1N1流感病毒美国加利福尼亚毒株(A/California/07/2009(H1N1))基因序列,采用全基因合成的方法合成由1701个碱基组成的HA编码基因。经核酸序列分析证实后,将HA基因克隆至HDAd穿梭载体pSC11-CMV,经限制性内切酶分析后,进一步将含有HA基因的表达盒克隆至HDAd骨架质粒pSC15B,构建pSC15B/HA重组质粒,并以多组限制性内切酶进行分析鉴定。
Pme I消化pSC15B/HA去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/HA DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/HA载体粗提液,随后以HDAd/HA粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/HA达到复制极限。
随后,以HDAd/HA和辅助病毒感染293Cre4细胞大量制备HDAd/HA,CsCl密度梯度及等密度梯度两次超速离心纯化,利用透射电子显微镜观察病毒形态,分子生物学技术体外鉴定HDAd/HA表达情况。
结果：成功构建了可表达甲流H1N1流感病毒HA蛋白的HDAd/HA载体,通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd/HA载体,透射电子显微镜观察到腺病毒,体外感染293细胞,RT-PCR检测到HA基因有转录。
结论：应用HDAd系统,成功构建了HDAd/HA重组腺病毒,并完成了该病毒的大量制备和纯化,为体内免疫学效力试验奠定了初步基础。
参考文献
[1]Vaccination Strategies to Promote Mucosal Antibody Responses[J].Kang Chen;;Andrea Cerutti.Immunity,2010(4)
[2]A candidate H1N1 pandemic influenza vaccine elicits protective immunity in mice.[J].Julia Steitz;;Peter G Barlow;;Jaber Hossain;;Eun Kim;;Kaori Okada;;Tom Kenniston;;Sheri Rea;;Ruben O Donis;;Andrea Gambotto.PLoS ONE,2010(5)
[3]Emergence of a novel swine-origin influenza A(H1N1)virus in humans.[J].Dawood Fatimah S;;Jain Seema;;Finelli Lyn;;Shaw Michael W;;Lindstrom Stephen;;Garten Rebecca J;;Gubareva Larisa V;;Xu Xiyan;;Bridges Carolyn B;;Uyeki Timothy M.The New England journal of medicine,2009(25)
[4]Emergence of a novel swine-origin influenza A virus(S-OIV)H1N1 virus in humans[J].J.S.Malik Peiris;;Leo L.M.Poon;;Yi Guan.Journal of Clinical Virology,2009(3)
[5]江彦泽.可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及初步鉴定[D].北京交通大学,2012.