碘化丙啶粘管道该怎么清洗?

2023/3/16 14:39:56 作者:小满

在细胞周期检测或细胞死活鉴别中,经常会用到一些核酸染料,最常用的就是碘化丙啶(简称PI)。然而,PI用着方便、简单、便宜,但可能给管路清洗带来很大的麻烦,所以很多中心不愿意将机器给大家用来做细胞周期。另外,不仅仅是碘化丙啶,其它如7-AAD等核酸染料均存在粘附液路的风险。

碘化丙啶.jpg

但实际上,只要清洗得当,还是没关系的,大家无需过于担心。这里介绍一些国外FLOWER总结的清洗绝招,脑洞大开!大家可根据需要选择一种试试。

1.先跑一会儿DMSO,然后再用蒸馏水冲洗

由于PI在DMSO中的溶解度较高,所以可以考虑用DMSO先冲洗液路,但是国外有站友试了之后效果不是特别理想。

另外一个选择就是先用DMSO跑5分钟,然后再用Beckman Coulter的Clenz液跑5分钟,最后再用蒸馏水跑5分钟。

2.先跑乙醇,再用蒸馏水冲洗

是利用乙醇溶解度高的原理,但似乎效果也一般。

3.用次氯酸钠

用终浓度0.1~0.5%的次氯酸钠溶液。

对于特别粘冲的染料(例如AO、7-AAD等),有BD仪器用户建议在BD冲洗步骤上增加70%乙醇,也就是说:

(1)将终浓度0.1~0.5%的次氯酸钠溶液浸泡上样针,将支撑架打到一边,让上样针吸取1分钟,然后支撑架打回来,按照正常跑5分钟。

(2)用70%乙醇,重复步步骤。

(3)用蒸馏水,重复步步骤。

切记,每根管子跑完之后都要扔掉,不要重复使用。

4.PI喜欢DNA,那么我就用DNA来解决

这个原理很有意思,就是利用PI容易与DNA结合的方式,用放置了很长时间的外周血样本,由于标本中的细胞基本上都碎了,所以白细胞释放出大量的DNA。新加坡的Te Chih推荐可以用这类标本上机,利用DNA结合残留的PI。

5.用咖啡因

这个想法很有意思,实属脑洞大开,但却有文章作为支撑。

大多数荧光染料通过静电可粘附在流式细胞仪液路上,从而对后续样品中的细胞产生影响。Bedner等人观察到,除了漂白水以外,也可以利用咖啡因溶液(例如以PBS配制的50mM咖啡因溶液)去除液路中或已被荧光染料污染的细胞中的粘附荧光素。咖啡因对PI或吖啶染料有相当高的亲和力,并且可以用于从染色的细胞、染色的凝胶以及静电结合这些染料的细胞、玻璃或塑料表面去除这些异常粘附的染料。

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