背景[1-6]
Recombinant Human Amphiregulin（重组人双调蛋白）是将Amphiregulin的基因重组到大肠杆菌质粒中再在大肠杆菌大量诱导表达的蛋白。Recombinant Human Amphiregulin（重组人双调蛋白）也被称为AREG，是一种蛋白质，在人中由编码AREG基因。由该基因编码的蛋白质是表皮生长因子（EGF）家族的成员。它是一种自分泌生长因子，以及一个有丝分裂原为星形胶质细胞，施万细胞，成纤维细胞。它与表皮生长因子（EGF）和转化生长因子α（TGF-α）有关。该蛋白质与表皮生长因子受体（EGFR）相互作用，促进正常上皮细胞的生长。
双调蛋白（AREG）是表皮生长因子（EGF）家族成员之一，由252个氨基酸组成的跨膜前体（pro-AREG）通过ADAM-17剪切后与其受体EGFR结合，激活一系列下游信号转导通路，在不同类型肿瘤细胞中都表现出促进增值及抑制凋亡作用。有报道，在正常的肝组织中几乎检测不到AREG的表达，而在肝硬化及肝癌组织中表达明显增高，并在肝癌细胞的增殖，侵袭，转移，血管形成中发挥重要作用。AREG对胰腺癌多种MMP/TIMP蛋白质表达有影响,其中对MMP-9影响最显著。
同时,AREG受体EGFR的磷酸化水平显著下调；敲低AREG表达能拮抗AREG/EGFR信号轴对ERK、AKT和STAT3等多条信号通路活化作用。转录因子NF-κB入核水平显著下降。上调AREG表达能够增强PANC-1细胞的迁移、侵袭能力。外源性升高AREG表达使PANC-1细胞E-Cadherin和ZO-1蛋白表达水平下调,Vimentin,β-catenin和MMP-9的蛋白表达水平上调,转录因子Snail和Slug表达增强,而ZEBl表达改变不明显；同时PANC-1细胞,AREG/EGFR信号轴可以活化ERK、AKT和STAT3信号通路,其中对ERK和AKT磷酸化水平的影响最为明显,同时能够增加PANC-1细胞NF-κB的转录入核水平,这种增强效应能够分别被PD153035和/或U1026减弱。
AREG/EGFR信号轴对胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT效应的上调作用能够被QZN拮抗。AREG在4例原代培养PSC中可均见不同程度表达,PSC能显著增强胰腺癌细胞迁移和侵袭能力,这种对胰腺癌细胞的趋化效应不能被AREG中和抗体所拮抗。
AREG通过和受体EGFR相互结合,激活EGFR胞内区(pY1068)磷酸化,通过AREG/EGFR信号轴活化胰腺癌细胞内ERK、AKT和STAT3信号通路,上调NF-κB入核水平,继而使EMT相关转录因子Snail及Slug表达水平上调,抑制E-cadherin表达,并促使Vimentin和MMP-9表达,使胰腺癌细胞发生EMT。AREG/EGFR信号轴可能是治疗胰腺癌的潜在靶点,抑制该信号轴的激活在体外实验中能有效抑制胰腺癌的侵袭和转移。
应用[7][8]
重组人AMPHIREGULIN可用于Recombinant Human Amphiregulin肿瘤细胞相关通路研究：
在双调蛋白过表达促进小鼠肠癌CT26细胞的体内生长的实验中将携带AREG基因的重组慢病毒载体转染至小鼠肠癌CT26细胞、黑素瘤B16细胞和肝癌LPC-Akt细胞,同时以转染空载体细胞作为阴性对照。采用MTT法、克隆形成实验和FCM法分别检测AREG过表达后细胞的体外增殖和克隆形成能力以及细胞周期进程。构建AREG过表达CT26细胞的小鼠移植瘤模型,观察小鼠体内移植瘤的生长情况,并且采用FCM法和实时荧光定量PCR法分别检测移植瘤组织中免疫细胞的分布情况以及趋化因子的表达水平。
参考文献
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[4]Amphiregulin Enhances Regulatory T Cell-Suppressive Function via the Epidermal Growth Factor Receptor[J].Dietmar M.W.Zaiss,Jorg van Loosdregt,Andrea Gorlani,Cornelis P.J.Bekker,Andrea Gr?ne,Maria Sibilia,Paul M.P.van Bergen en Henegouwen,Rob C.Roovers,Paul J.Coffer,Alice J.A.M.Sijts.Immunity.2013(2)
[5]A CXCL1 Paracrine Network Links Cancer Chemoresistance and Metastasis[J].Swarnali Acharyya,Thordur Oskarsson,Sakari Vanharanta,Srinivas Malladi,Juliet Kim,Patrick G.Morris,Katia Manova-Todorova,Margaret Leversha,Nancy Hogg,Venkatraman E.Seshan,Larry Norton,Edi Brogi,Joan Massagué.Cell.2012(1)
[6]Nuclear envelope-localized EGF family protein amphiregulin activates breast cancer cell migration in an EGF-like domain independent manner[J].Hisae Tanaka,Yu Nishioka,Yuhki Yokoyama,Shigeki Higashiyama,Nariaki Matsuura,Shuji Matsuura,Miki Hieda.Biochemical and Biophysical Research Communications.2012(4)
[7]The multiple roles of amphiregulin in human cancer[J].Benoit Busser,Lucie Sancey,Elisabeth Brambilla,Jean-Luc Coll,Amandine Hurbin.BBA-Reviews on Cancer.2011(2)
[8]丁琪,刘昀,张力,刘永忠.双调蛋白过表达促进小鼠肠癌CT26细胞的体内生长[J].肿瘤,2017,37(07):690-699.