背景[1-3]
大巴贝虫PCR试剂盒是一种用于检测大巴贝虫的PCR试剂盒。大巴贝虫是一种常见的寄生虫，可以引起多种疾病，如疟疾、巴贝斯虫病等。该试剂盒包含以下主要成分：
PCR反应液：包含聚合酶、dNTPs、引物等，用于扩增大巴贝虫的DNA。
阳性对照：含有已知的大巴贝虫DNA，用于验证试剂盒的准确性和可靠性。
阴性对照：不含大巴贝虫DNA，用于排除假阳性结果。
样品处理液：用于提取和处理样品中的DNA。
缓冲液：用于调节PCR反应液的pH值和离子强度。
其他辅助试剂：如Tris-HCl、EDTA、BSA等，用于调节反应条件和提高反应效率。
使用大巴贝虫PCR试剂盒时，首先需要提取样品中的DNA，然后将其加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的特异性，可以确定样品中是否存在大巴贝虫的DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床实验室和研究机构对大巴贝虫的快速检测和鉴定。
大巴贝虫PCR试剂盒
大巴贝虫PCR试剂盒的操作步骤如下：
1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。
2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。
3.PCR反应体系准备：根据大巴贝虫PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。
4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。
5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在大巴贝虫的感染。
应用[4][5]
大巴贝虫PCR试剂盒可以用于马泰勒虫分类学定位佐证及PCR、ELISA检测方法的建立
研究用分离自我国的马泰勒虫和驽巴贝斯虫进行动物接种培养,采集含虫血,提取虫体基因组DNA。并根据GenBank上报道的马梨形虫18S rRNA、马泰勒虫Hsp70和EMA1基因,设计引物,利用大巴贝虫PCR试剂盒PCR方法分别获得了相应大小的核苷酸片段,将扩增产物克隆于pGEM-T easy载体,PCR鉴定阳性模板用于核苷酸序列测定。
大巴贝虫PCR试剂盒结果显示获得的马泰勒虫18S rRNA核苷酸片段大小为913bp,驽巴贝斯虫18S rRNA核苷酸片段大小为452bp,马泰勒虫Hsp70核苷酸片段大小为1920bp,EMA1核苷酸片段大小为819bp。利用以上序列分别建立物种间的种系发生树,同时利用18S rRNA序列特征建立了马泰勒虫和驽巴贝斯虫大巴贝虫PCR试剂盒PCR诊断方法。利用EMA1基因建立了马泰勒虫ELISA诊断方法。18S rRNA作为分类学鉴定的标志性基因序列,已经在多个物种的分离鉴定中得应用。本试验基于该基因的V4高变区对我国马梨形虫的分类学定位进行研究,发现之前称为马巴贝斯(Babesia equi)的虫种和泰勒虫种有着更为密切的关系,它们处于同一分支,而与巴贝斯虫种处于明显的两个分支,这与之前将马泰勒虫定名为马巴贝斯虫的说法完全相悖。同时发现我国马梨形虫与西班牙马梨形虫亲缘关系最近。为了进一步验证这一结果,同时克隆了马泰勒虫的Hsp70基因,系统发育分析结果与18S rRNA为基础研究的结果是一致的。以上研究结果从不同角度佐证了我国马泰勒虫在国际分类学中的地位并从分子进化角度诠释了马巴贝斯虫(旧称)隶属于泰勒虫科,泰勒虫属这一事实,该种的正确命名应为马泰勒虫。马梨形虫对我国乃至世界马属动物产业的发展有着极其严重的危害,而我国依然没有自主知识产权的产品应用于马梨形虫病的诊断。本试验利用获得的马梨形虫18S rRNA建立了马梨形虫病的PCR诊断方法。
大巴贝虫PCR试剂盒PCR结果显示,利用马泰勒虫特异性引物检测马泰勒虫、驽巴贝斯虫、尤氏泰勒虫、中华泰勒虫、环形泰勒虫、绵阳泰勒虫、吕氏泰勒虫、瑟氏泰勒虫时仅有马泰勒虫模板检测为阳性。而用驽巴贝斯虫特异性引物检测驽巴贝斯虫、马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、莫氏巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫时也仅有驽巴贝斯虫模板及混合样本为阳性,各自的引物分别对马泰勒虫或驽巴贝斯虫没有交叉反应。敏感性试验中,对定量到100ng/ul马梨形虫基因组模板进行扩增显示,马泰勒虫和驽巴贝斯虫的检出率分别为10-13、10-10。该方法和常规的显微镜镜检方法对54份田间样品检测结果表明,大巴贝虫PCR试剂盒PCR方法比显微镜法检测有着更高的检出率。常规的分子诊断方法已经不能满足于大批量的田间样品检测的需求,因此寻找好的抗原建立血清学诊断方法就显得尤为重要。
参考文献
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[3]Molecular detection of Theileria equi and Babesia caballi in the bone marrow of asymptomatic horses[J].Pierre-Hugues Pitel;;Stéphane Pronost.Veterinary Parasitology,2010(1)
[4]A case of transplacental transmission of Theileria equi in a foal in Trinidad[J].Karla C.Georges;;Chuckwudozi D.Ezeokoli;;Olivier Sparagano;;Indira Pargass;;Mervyn Campbell;;Roger D’Abadie;;Michael J.Yabsley.Veterinary Parasitology,2010(3)
[5]罗金.马泰勒虫分类学定位佐证及PCR、ELISA检测方法的建立[D].甘肃农业大学,2012.