抗Ku抗体的靶抗原Ku(p70/p80)是一种DNA结合蛋白,参与DNA修复与多种核蛋白磷酸化的调节,也参与V(D)J基因重排与端粒保护[1]。抗Ku抗体最早于1981年在硬皮病多发性肌炎重叠综合征患者中被检出,对重叠综合征尤其是系统性硬化多发性肌炎重叠具有高度特异性[1]。人抗Ku抗体(anti-Ku-Ab)Elisa试剂盒是一种用于检测人血清、血浆、组织匀浆等样本中抗Ku抗体浓度的免疫学诊断工具,基于双抗体夹心法原理,通过酶标仪测定吸光度(OD值)实现定量分析。
在一项病案报道中,患者女性30岁,因多关节肿痛伴乏力入院。外院ENA谱示抗Ku抗体(+++)、抗着丝点抗体(+++)、抗U1RNP(+)。入院查ANA 1:1000呈核颗粒型,肌酸激酶1296 U/L,肌肉活检见淋巴细胞浸润与局灶肌纤维萎缩,诊断为重叠综合征(系统性硬化合并多发性肌炎)[1]。治疗给予甲泼尼龙每日160 mg共5日,逐渐减量后联合甲氨蝶呤每周10 mg、青霉胺片0.25 g每日2次,皮肤变硬与关节肿痛逐渐恢复[1]。据此,面对皮肤、血管与肌肉表现温和的系统性硬化患者,若ANA呈强阳性斑点,应特别检测抗Ku抗体,并提高肌炎与间质性肺病的筛查警惕性[1]。该病例的“+++”属目视判读的半定量结果,跨实验室难以比较,可以把条带强度换成可读数的浓度,通过人抗Ku抗体(anti-Ku-Ab)Elisa试剂盒得到这一读数。
研究发现,抗Ku抗体在结缔组织病中的流行率取决于疾病类型、患者系列与遗传背景,也取决于检测方法。重叠性自身免疫性肌炎患者血清抗Ku抗体的检出率,从高特异性IPP法的2%到免疫印迹法的16%~33%不等[1]。系统性硬化中抗Ku抗体的发生率为1.5%~16%,其中38%分离到抗Ku-p70、43%两种抗体兼有[1]。而在2140例系统性硬化受试者的国际多中心队列中,单特异性抗Ku抗体仅24例(1.1%)[1]。同一分析物在不同报道中相差一个数量级,仅用人群差异难以解释,抗原来源、表位覆盖与判读阈值必然具有重大关系。当阳性率在漂移时,人抗Ku抗体(anti-Ku-Ab)Elisa试剂盒给出的连续读数能成为一种可比的参照。
第三项是对流免疫电泳队列的随访结果。该研究自1987年起用对流免疫电泳法检测抗Ku抗体,共检出27例,其中24例资料完整,系统性红斑狼疮9例、未分化结缔组织病7例、硬皮病4例、难治性贫血3例等[2]。临床表现以雷诺现象19例、滑膜炎15例、肌痛13例、食管反流11例为主[2]。抗核抗体核型以核仁斑点型20例(滴度大于1:640)最为突出,被认为是抗Ku抗体的典型核型。19例复查抗Ku抗体,15例仍为阳性[2]。文献提示,抗Ku抗体阳性者的其他自身抗体阳性率很低,其出现可能预示病情相对较轻[2]。该研究中若改用人抗Ku抗体(anti-Ku-Ab)Elisa试剂盒,19例中15例的持续阳性可还原为滴度轨迹。
将自身免疫性溶血性贫血患者133例(原发性94例、继发性39例)、其他自身免疫性疾病患者55例与健康体检者106例,四种抗体均采用免疫印迹法[3]。结果抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体在该病组显著升高,抗PR3抗体的灵敏度与特异度分别为82.0%和92.5%[3]。而抗Ku抗体的阳性率在四组中分别为4.3%、5.1%、5.5%和4.7%,差异无统计学意义,校正年龄、性别、吸烟与饮酒后仍未显示关联,作者据此未将其列为候选标志物[3]。这一结论评价的是阳性或阴性,而不是抗体水平。4.3%~5.5%恰是定性方法分辨率最差的区间,也正是人抗Ku抗体(anti-Ku-Ab)Elisa试剂盒的适用位置。
综合得知,使用人抗Ku抗体(anti-Ku-Ab)Elisa试剂盒需要注意,样本侧宜采血后及时分离血清、分装后低温保存,避免反复冻融。检测须严格按试剂盒说明书进行,并保持同批孵育温度与时间一致[3]。落到抗Ku抗体本身,有三处必须固定的变量,抗原来源是天然p70/p80还是单一重组亚基,因为抗Ku-p70与抗Ku-p80的分布并不均等[1]。判读口径是目视半定量、阳性或阴性,还是连续浓度。核型描述可以佐证但不能替代特异性检测[2]。
参考文献
[1] 许砚秋, 张莹. 抗Ku抗体阳性的重叠综合征1例报道并文献复习[J]. 风湿病与关节炎, 2022, 11(4): 32-34.
[2] 徐朝焰. 抗Ku抗体与临床及血清学表现的相互关系[J]. 国外医学(内科学分册), 2000, 27(8): 368.
[3] 杜汉芳, 许海军, 赵颖. 抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体诊断自身免疫性溶血性贫血的分析[J]. 国际检验医学杂志, 2019, 40(1): 66-70.