全人单克隆抗体开发

背景^[1-6]

全人单克隆抗体开发通过整合高效的噬菌体展示技术和细胞展示技术，为客户提供基于噬菌体展示抗体库和细胞展示抗体库的全人源抗体筛选服务。人源化抗体（humanized antibody）又称互补决定区移植抗体，是指抗体的可变区部分（即Vh和VI区）或抗体所有全部由人类抗体基因所编码。全人源化抗体是指将人体抗体基因通过转基因或转染色体技术，将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达到抗体全人源化的目的。

已建立多种方法生产完全人源性抗体，主要有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体展示技术和RNA-多肽技术。噬菌体展示技术（phage display）是将多肽或蛋白质的编码基因插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。

展示到噬菌体表面的多肽或蛋白保持相对独立的空间结构和生物活性，可以与靶分子结合和识别。噬菌体展示的肽库或蛋白库与固相抗原结合，洗去未结合的噬菌体，然后用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过3-5轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。

技术流程:

1. 抗体库构建

从B淋巴细胞中扩增全套抗体的H链和L链基因文库，抗体片段群与噬菌体衣壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面，形成噬菌体展示抗体库。主要有三种：scFv单链抗体库、Fab抗体库、sdAb单域抗体库。

2. 抗体库筛选

使用噬菌体展示文库，针对特定靶分子进行3-5轮亲和筛选，可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体，得到相应的DNA序列信息。

应用^[7][8]

1.可用于抗体人源化改造

单抗人源化比例不断升高，单抗的药物靶位逐渐多样化，除了传统的细胞表面抗原，还包括了常见的细胞因子，部分研制中的单抗药物甚至可以识别多个抗原表位，而且单抗药物的结构也不限于完整的单抗分子。联合小分子等的治疗方案逐渐增加，日益受到医疗工作者的重视。因此，作为一种高科技含量的药物，单抗药物企业的科技水平决定了其竞争力，也决定了药物的治疗效果和市场价值。

2.人源单抗药物开发

抗体治疗是生物治疗的一个重要方面,也是肿瘤生物治疗的一个重要方向。其中抗表皮生长因子受体（EGFR）治疗性抗体药物已经在多种肿瘤治疗中应用。但是EGFR在多种正常细胞和组织中均有表达,使得EGFR抗体具有一定的局限性,而表皮生长因子受体3型突变体（EGFRvⅢ）仅在肿瘤中存在,因此相对于EGFR,EGFRvⅢ是一个更为理想的靶点。全人单克隆抗体开发就可以寻求与表皮生长因子受体3型突变体（EGFRvⅢ）受体特异性结合的单克隆抗体。

参考文献

[1]KRAS mutation testing for predicting response to anti-EGFR therapy for colorectal carcinoma:proposal for an European quality assurance program[J].J.H.J.M.Krieken,A.Jung,T.Kirchner,F.Carneiro,R.Seruca,F.T.Bosman,P.Quirke,J.F.Fléjou,T.Plato Hansen,G.Hertogh,P.Jares,C.Langner,G.Hoefler,M.Ligtenberg,D.Tiniakos,S.Tejpar,G.Bevilacqua,A.Ensari.Virchows Archiv.2008(5)

[2]Antitumor activity of a combination of trastuzumab(Herceptin)and oralfluoropyrimidine S-1 on human epidermal growth factor receptor 2-overexpressingpancreatic cancer[J].Hiroyuki Saeki,Shunsuke Yanoma,Shouji Takemiya,Yukio Sugimasa,Makoto Akaike,Norio Yukawa,Yasushi Rino,Toshio Imada.Oncology Reports.2007(2)

[3]Use of human germline genes in a CDR homology-based approach to antibody humanization[J].William Ying Khee Hwang,Juan Carlos Almagro,Timothy N.Buss,Philip Tan,Jefferson Foote.Methods.2005(1)

[4]Hepatocellular carcinoma:Current management and future trends[J].Brian I.Carr.Gastroenterology.2004(5)

[5]Current methods for the generation of human antibodies for the treatment of autoimmune diseases[J].Jane Osbourn,Lutz Jermutus,Alex Duncan.Drug Discovery Today.2003(18)

[6]Therapeutic potential of ABX-EGF:A fully human anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibody for cancer treatment[J].David H Lynch,Xiao-Dong Yang.Seminars in Oncology.2002(1)

[7]Epidermal growth factor receptor biology(IMC-C225)[J].Edward S.Kim,Fadlo R.Khuri,Roy S.Herbst.Current Opinion in Oncology.2001(6)