背景[1-3]
FPR1抗体是一种针对FPR1（Formyl Peptide Receptor 1）的特异性抗体，广泛用于科学研究和实验中。这种抗体能够识别并绑定FPR1蛋白，在多种应用中发挥作用，例如免疫组化（IHC）、西方印迹（WB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术（Flow Cytometry）和免疫细胞化学（ICC/IF）等。
FPR1是一种在白细胞、中性粒细胞和单核细胞上表达的七跨膜pertussis毒素敏感的G蛋白偶联受体（GPCR）。它通过与细菌产生的甲酰化肽结合，吸引中性粒细胞到炎症部位，并促进其脱颗粒。FPR1在人类和小鼠中的氨基酸序列同源性为73%。
不同供应商提供的FPR1抗体具有不同的特性和应用范围。例如，Invitrogen提供了多种FPR1抗体，这些抗体可用于多种实验应用，并针对人类、小鼠、非人灵长类和大鼠样本中的FPR1进行检测。Abcam提供的FPR1兔多克隆抗体（ab113531）适用于WB、IHC-P和ICC/IF等实验，并与人样本发生反应。R&D Systems提供的FPR1单克隆抗体（MAB3744）特异于人类FPR1，适用于流式细胞术和免疫细胞化学等实验。
FPR1抗体
在选择和使用FPR1抗体时，应根据具体的实验需求和样本类型来选择合适的抗体，并遵循制造商提供的操作指南和推荐稀释比。
在使用FPR1抗体进行实验时，需要注意以下几个方面：
1.抗体选择：确保选择的抗体与您的实验目的和物种特异性相匹配。例如，如果您的实验对象是人类样本，则需要选择针对人类FPR1的抗体。
2.储存条件：遵循制造商提供的储存指南，以保持抗体的活性和稳定性。通常，抗体应储存在-20°C或更低温度，避免反复冻融。
3.稀释比例：根据制造商的建议或通过预实验确定最佳稀释比例。不同的实验方法（如WB、IHC、ICC/IF等）可能需要不同的抗体稀释比。
4.交叉反应性：检查抗体是否与其他物种或蛋白有交叉反应性，确保实验结果的特异性。
5.阴性对照：在实验中设置阴性对照，以验证抗体的特异性，排除非特异性结合。
6.实验流程：严格按照实验步骤进行操作，确保实验条件的一致性，减少误差。
7.孵育时间：根据实验类型和抗体说明书推荐的孵育时间进行操作，过长或过短的孵育时间都可能导致实验结果不准确。
8.洗涤步骤：充分洗涤样本，以去除未结合的抗体和杂质，减少背景信号。
9.检测系统：确保使用的检测系统（如二抗、显色剂等）与一抗兼容，并按照说明书操作。
10生物安全：在使用生物试剂时，应采取适当的生物安全措施，如穿戴实验室外套、手套等。
应用[4][5]
FPR1抗体可以用于葡萄籽提取物F2抗胶质瘤作用的甲酰肽受体机制研究
F2为葡萄籽来源的聚合度为2-15的原花青素低聚体混合物,我们前期研究结果显示,F2能诱导人恶性胶质瘤细胞系U-87发生类凋亡(paraptosis),且能抑制FPR1的活化和功能,提示其具有抗胶质瘤作用。本文旨在从FPR1的角度,阐明F2抗胶质瘤的作用机制。
本研究从以下四方面着手:1.确定FPR1在F2诱导U-87趋化中的作用。有文献报道,甲酰肽(formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLF)是FPR1的激动剂,能诱导U-87细胞趋化。前期实验证明,F2除了能够抑制fMLF诱导的U-87细胞的趋化,本身还能诱导趋化。本研究首先采用cross-attenuate实验方法证实F2与fMLF共同作用于同一受体;然后采用RNAi方法沉默U-87细胞中的FPR1或用抗FPR1抗体孵育U-87细胞,发现二者均能抑制F2的趋化效应。此外受体竞争结合实验发现,F2可以特异性作用于FPR1。提示,F2同fMLF相似,可特异性作用于FPR1,且通过FPR1诱导U-87细胞趋化。
2. 判断F2是否为FPR1的部分激动剂(partial agonist)。部分激动剂具有一定的亲和力,但内在活性低,与受体结合后仅能产生较弱的效应。但当部分激动剂与完全激动剂(full agonist)同时使用时,可以拮抗完全激动剂的效应。本研究发现,非细胞毒浓度的F2单独作用时,不但能显著诱导U-87细胞趋化,还可以促使FPR1内吞。另外,F2还能激活FPR1介导的PI3K-PKCζ-MAPKs信号通路,且F2对U-87细胞的趋化效应与ERK1/2MAPK信号通路的活化有关。与fMLF不同的是,F2是FPR1/FPR1抗体弱激动剂,它不能激活U-87细胞中FPR1介导的PI3K-AKT信号通路和钙动员。而F2与完全激动剂fMLF联用时,可以显著拮抗fMLF的效应。提示,F2呈现出了典型的部分激动剂的特征。
3.探讨F2对FPR1活化和功能的抑制作用。已知FPR1/FPR1抗体被激动剂激活后,可以使表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)Tyr992磷酸化,进而促进U-87细胞增殖和趋化。此外,FPR1还可介导PI3K-Akt信号通路的激活,从而参与肿瘤的存活、迁移和血管生成。本研究发现,细胞毒浓度的F2可显著抑制FPR1介导的EGFR的转活和PI3K-Akt信号通路,从而抑制了其下游蛋白Bc1-2/Bax、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子.(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。提示,F2可通过抑制FPR1/FPR1抗体介导的信号通路及其下游与细胞存活和血管生成相关蛋白的表达而发挥抗胶质瘤作用。
参考文献
[1]Bcl2 at the endoplasmic reticulum protects against a Bax/Bak-independent paraptosis-like cell death pathway initiated via p20Bap31[J].Hannah M.Heath-Engel;;Bing Wang;;Gordon C.Shore.BBA-Molecular Cell Research,2011(2)
[2]Expression and Signaling of Formyl-Peptide Receptors in the Brain[J].Fabio Cattaneo;;Germano Guerra;;Rosario Ammendola.Neurochemical Research,2010(12)
[3]Dietary‐feeding of grape seed extract prevents azoxymethane‐induced colonic aberrant crypt foci formation in fischer 344 rats[J].BalaiyaVelmurugan;Rana P.Singh;RajeshAgarwal;ChaplaAgarwal.Mol.Carcinog.,2010(7)
[4]Signaling Mechanisms in Neuroendocrine Tumors as Targets for Therapy[J].Barbara Zarebczan;;Herbert Chen.Endocrinology and Metabolism Clinics of North America,2010(4)
[5]王青.葡萄籽提取物F2抗胶质瘤作用的甲酰肽受体机制研究[D].沈阳药科大学,2013.