概述[1]
目前国内外并没有一个得到公认的、方便实用的间充质干细胞的培养方法。大多数仍采用添加胎牛血清(FBS)的培养基进行间充质干细胞培养。但是这种添加的异种血清可能会携带细菌、病毒等，存在着诸多安全隐患。异种血清带来的异源性蛋白，容易引起人体的过敏反应。有研究表明，MSC在体外培养过程中会吞噬培养基中的蛋白，因此含有胎牛血清的培养基，可使MSC细胞中含有牛血清蛋白，会使受者引起免疫反应。这些问题的存在，使人们限制了使用血清等添加物来培养间充质干细胞在临床中的应用。
特点[1]
CN201811115805.5披露了一种间充质干细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加物，所述添加物包括氨基酸、缓冲剂、白蛋白、其他蛋白以及营养因子。
具有以下优点：
(1)、无血清培养基不含动物血清或其他异源性蛋白，减少了细胞制剂被污染的危险。在无血清培养基中添加了特定的营养因子，提高了细胞扩增效率并保持了干细胞的生物特性，增加了间充质干细胞的活率，确保了细胞的质量达到临床应用标准。
(2)、简化细胞分离步骤，组织消化后的细胞即可直接用于原代培养，并保证培养细胞的专一性。
(3)、使用间充质干细胞无血清培养基，细胞保持良好的贴壁性，呈现出梭形的成纤维细胞形态，同时经多代培养后，细胞仍可保持正常状态；细胞生长曲线说明，细胞维持高扩增效率；细胞免疫表型分析说明，CD29、CD73、CD90和CD105阳性表达物达95％以上；而CD14、CD34、CD45、CD79a和HLA-DR等阴性表达物检测显示在2％以下，达到临床应用水平。
制备[1]
间充质干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加物。基础培养基为DMEM，添加物包括氨基酸、缓冲剂、白蛋白、其他蛋白以及营养因子。氨基酸包括L-酪氨酸(40mg/L)、L-胱氨酸(20mg/L)、甘氨酸(10mg/L)、L-缬氨酸(70mg/L)、L-色氨酸(20mg/L)、L-苯丙氨酸(50mg/L)、L-丝氨酸(50mg/L)、L-苏氨酸(75mg/L)、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(500mg/L)和L-甘氨酰-L-谷氨酰胺(500mg/L)。
缓冲剂包括L-磷酸甘油二钠盐水合物(1.5g/L)以及4-羟乙基哌嗪乙磺酸(1.2g/L)。
再者，白蛋白的浓度为：2g/L。其他蛋白包括Holo Transferrin(人全铁转铁蛋白)，营养因子包括Cholesterol(胆固醇)、EGF以及bFGF。这些添加物的浓度为：Holo Transferrin 5mg/L、Cholesterol 0.125mg/L、EGF0.001mg/L以及bFGF 0.001mg/L。
根据上述制备间充质干细胞的无血清培养基，并用于间充质干细胞的原代、传代和扩增培养。CN201811115805.5使用脐带来源间充质干细胞作为技术实施对象材料，按照以下步骤方案进行脐带间充质干细胞的分离、原代培养、传代和扩增培养。通过记录传代培养细胞的细胞形态、生长曲线和流式细胞分析细胞表面抗原，分析使用CN201811115805.5提供的无血清培养基扩增间充质干细胞的效果(结果如图1、图2和图3所示)。
主要参考资料
[1] CN201811115805.5 一种间充质干细胞无血清培养基