介绍
N-芴甲氧羰基-O-苄基-L-磷酸酪氨酸（Fmoc-Tyr-OTBDMS，TBDMS 为叔丁基二甲基硅基）是一种在固相肽合成中用于引入O-磷酸酪氨酸残基的重要衍生物，在蛋白质中酪氨酸残基的磷酸化修饰有所应用。
N-芴甲氧羰基-O-苄基-L-磷酸酪氨酸
合成方法
首先利用二苄基N,N-二乙基磷酰胺进行亚磷酸三酯磷酸化反应，接着用叔丁基过氧化氢氧化生成的二苄基亚磷酸三酯中间体，最后经乙酸水溶液处理去除硅基酯，最终以64%的收率得到目标产物N-芴甲氧羰基-O-苄基-L-磷酸酪氨酸。其结构经13C NMR光谱、元素分析和正离子FAB-质谱（m/z 686 M+Na+）确认，纯度通过反相HPLC测定。
在固相肽合成中的应用
N-芴甲氧羰基-O-苄基-L-磷酸酪氨酸可以用于合成包含病毒蛋白p85gag-fes序列的七肽以及表皮生长因子受体激酶的主要自磷酸化位点的十三肽。采用Fmoc-聚酰胺固相肽合成方法的连续流变体。肽键形成反应使用Nα-Fmoc-氨基酸（3 当量）、苯并三唑-1-氧基三（二甲基氨基）六氟磷酸磷（BOP）、1-羟基苯并三唑（HOBt）和N-甲基吗啉（3:3:4.5 当量）等为原料，酰化时间为25分钟，天冬酰胺以其邻硝基苯酯形式（3 当量）在HOBt催化下引入。Nα-Fmoc脱保护使用20%哌啶的DMF溶液处理10分钟。
稳定性问题及解决策略
由N-芴甲氧羰基-O-苄基-L-磷酸酪氨酸合成的多肽化合物（七肽或十三肽）中的酪氨酸-磷酸酯键对TFA不完全稳定，用95% TFA-5%硫代苯甲醚处理肽树脂时，会产生约9%的脱磷酸化杂质；用1 mol/dm3 TMSBr-PhSMe-TFA处理时也有类似情况。同时，Tyr(PO)3Me2在Fmoc固相合成中会被强亲核试剂哌啶去除一个甲基保护基，存在发生副反应的可能。而对于Tyr(PO)3Bzl2（20% 哌啶的DMF溶液）会使其快速单脱苄基，不过使用非亲核性碱1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯，在浓度为1 mol/dm3（15.4%）的DMF溶液中，脱保护速度较慢t1/2为14小时），浓度为2%的DBU-DMF溶液能快速进行Nα-Fmoc脱保护且无明显副反应，因此1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯是该衍生物在固相肽合成中Fmoc脱保护的理想试剂[1]。
参考文献
[1]Miyajima Y ,Ochiai K ,Fujii S .Design, Synthesis, and Evaluation ofB -(Trifluoromethyl)phenyl Phosphine–Borane Derivatives as Novel Progesterone Receptor Antagonists[J].Molecules,2024,29(7):