背景[1-3]
人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒采用的是双抗体夹心法酶联免疫吸附检测技术（ELISA）。测定样品中人白介素17(IL-17)水平。向预先包被了抗人白介素17(IL-17)抗体的酶标孔中，加入标准品和样本，温育后，加入生物素标记的抗白介素17A抗体。再与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，样本中的人白介素17(IL-17)浓度与OD值成正比，通过绘制标准曲线计算出样本中人白介素17(IL-17)的浓度。
人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒
人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒操作步骤：
1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
20ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
10ng/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
5ng/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
2.5ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.25ng/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4、配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍（48T的20倍）稀释后备用
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒可以用于白介素17（IL-17）在大肠埃希菌诱导的新生大鼠败血症中的意义
建立新生大鼠大肠埃希菌败血症模型,分析细胞因子IL-17在肺、肝组织中的表达以及血浆中水平的变化,来探讨IL-17在新生大鼠败血症中的作用及机制,进一步了解淋巴细胞分泌的细胞因子工L-17和巨噬细胞表面CD163在炎症反应中的作用,通过其表达水平的变化了解机体的免疫状况。
方法：选用7日龄无特定病原体(SPF级)的Sprague-Dawley(SD)大鼠84只,雌雄不限,质量16-20g,分为两组,即对照组和败血症组,每组42只。所有动物按照随机原则分入实验后第2、4、6、8、12、24、48小时7个时间点,每个时间点均为6只新生SD大鼠。败血症组采用腹腔注射大肠埃希菌(E.coli)方法来建立新生大鼠败血症模型；对照组则用采用腹腔注射等量生理盐水的方法来建立新生大鼠对照组模型。对照组和败血症组分别于设定的七个时间点麻醉动物,心脏采血,取肺脏和肝脏固定于福尔马林中备用。用人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒检测血浆中IL-17在各个时间点的水平,用免疫组织化学分析的方法检测肺组织、肝组织IL-17的表达。
人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒结果：1.对照组新生大鼠血浆中IL-17和肺组织、肝组织IL-17各时间点表达水平均无显著性差异(P>0.05)；2.败血症组新生大鼠血浆中IL-17的表达水平,随着实验时间的延长而逐渐升高,至12小时左右达高峰,一直延续到48小时；3.败血症组新生大鼠肺组织中IL-17的表达,随着时实验间的延长,于12小时左右达到高峰,实验至48小时一直处于较高水平；4.败血症组新生大鼠肝组织IL-17的表达,在实验至4小时,肝组织中IL-17水平较高,随后水平稍下降,但实验至12小时左右再次达到较高的水平,至实验48小时一直维持在较高水平；5.实验进展至2小时,败血症组新生大鼠血浆中IL-17水平和肺组织、肝组织中IL-17的表达分别与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)；实验进展至4小时始,败血症组新生大鼠血浆中IL-17水平和肺组织、肝组织中IL-17的表达分别高于对照组水平,差异有显著统计学意义(P<0.01)。
参考文献
[1]γδT cells protect against lung fibrosis via IL-22.[J].Simonian Philip L;;Wehrmann Fabian;;Roark Christina L;;Born Willi K;;O'Brien Rebecca L;;Fontenot Andrew P.The Journal of experimental medicine,2010(10)
[2]The systemic pro-inflammatory response in sepsis.[J].de Jong Hanna Katrien;;van der Poll Tom;;Wiersinga Willem Joost.Journal of innate immunity.2010
[3]The innate immune response to uropathogenic Escherichia coli involves IL-17A in a murine model of urinary tract infection.[J].Sivick Kelsey E;;Schaller Matthew A;;Smith Sara N;;Mobley Harry L T.Journal of immunology(Baltimore,Md.:1950).2010
[4]Differential Roles of Interleukin-17A and-17F in Host Defense against Mucoepithelial Bacterial Infection and Allergic Responses[J].Harumichi Ishigame;;Shigeru Kakuta;;Takeshi Nagai;;Motohiko Kadoki;;Aya Nambu;;Yutaka Komiyama;;Noriyuki Fujikado;;Yuko Tanahashi;;Aoi Akitsu;;Hayato Kotaki;;Katsuko Sudo;;Susumu Nakae;;Chihiro Sasakawa;;Yoichiro Iwakura.Immunity,2009(1)
[5]韩玉杰.白介素17（IL-17）在大肠埃希菌诱导的新生大鼠败血症中的意义[D].苏州大学,2012.