XTT 钠盐主要用作细胞代谢活性的指标。它可以被还原成橙黄色的溶液，只有活细胞具有还原功能。XTT 钠盐的使用可以用于测定细胞的活性和生长。它广泛应用于细胞毒性测试，细胞增殖、细胞迁移和细胞存活的研究。1976年，Morales首次将BCG直接注入膀胱治疗复发性浅表膀胱癌获得成功，BCG是临床上预防膀胱癌复发的首选药物，掌握BCG浓度检测的方法成为课题研究的关键。本文将介绍一种XTT 钠盐间接检测法测定BCG浓度。
检测方法
1、试剂的配置
精确称量XTT 钠盐30mg，用0.005mol/L的PBS(pH7.4) 充分溶解，精确配制得3mg/ml的XTT 钠盐溶液。将装有XTT 钠盐溶液的离心管置于水浴锅中，60℃水浴30min后，用5ml注射器和滤器进行除菌过滤，置于离心管中，并用封口膜密封后4℃保存备用;精确称量中间电子载体吩嗪硫酸甲酯PMS 1.62mg用0.005mol/L的PBS(pH7.4)充分溶解，精确配制0.81mg/ml的PMS溶液，用5ml注射器和滤器进行除菌过滤,用冻存管存储,并用封口膜密封后-20℃保存备用。实验前按照50ul PMS:1ml XTT混合，现配现用。
2、XTT方法检测时间的确定
取0.25、0.125、0.0625、0.03125 和0.015625mg/ml的BCG溶液各浓度样品100ul按照标记顺序置于96孔板中，每个浓度3复孔，100u V孔，另加25ul/孔XTT 钠盐试剂，分别培养24、36、48、72小时后，用酶标仪进行A450波长吸光度值检测，进行BCG浓度与吸光度值的线性相关性分析。
3、标准方程的建立
取50mg灌注用冻干BCG一支，加入BCG注射用水配制10mg/ml的BCG溶液。用移液枪精密量取该溶液320uL、160uL、80uL、40uL、20uL、10uL置于2mL具塞试管中，加入 BCG注射用水，稀释至2mL,制得1.6mg/mL、0.8mg/mL、0.4mg/mL、0.2mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL的标准溶液。取BCG各浓度样品100ul按照标记顺序置于96孔板中,每个浓度3复孔,100ul孔，另加25ul孔XTT 钠盐试剂，分别培养24小时后进行酶标仪A450吸光度值检测，做浓度-吸光度曲线，进行线性拟合，得到标准曲线，进行BCG浓度与吸光度值的线性相关性分析。
结果
所制备的标准系列浓度溶液分别经XTT法培养24、36、48、72小时后进行A450酶标仪检测，进行BCG浓度与吸光度值的线性拟合，如(a),(b),(c)所示，在所选浓度范围内，标准溶液在450nm处的吸光度与浓度呈良好的线性关系。由(d)图可以看出溶液的吸光度值与溶液浓度呈现比例上升的趋势，同一溶液浓度随培养时间的延长而增大。考虑到实验的快速性与便捷性，将XTT 钠盐法浓度检测时间定为BCG溶液培养后24小时即可取得较好的效果。
采用XTT 钠盐方法建立灌注用BCG溶液浓度标准曲线。标准曲线拟合后的线性方程为:Y=0.01854+2.24955X，相关系数r=0.99066，其中Y为溶液吸光度，X为浓度。可以看出，在所选浓度范围内，BCG溶液采用XTT 钠盐方法,采用酶标仪进行BCG浓度检测，在450nm处的吸光度与浓度呈良好的线性关系。由此可见，采用XTT方法进行BCG溶液浓度检测是一种方便、快捷、可靠的方法。
参考文献
[1]吴承格. 膀胱癌用BCG/Fe3O4/温敏凝胶集成材料靶向贴壁和缓释功能的研究[D]. 山东:山东大学,2014. DOI:10.7666/d.Y2594009.