烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的应用

2020/3/15 10:27:56

背景及概述[1][2]                                                        

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸又称辅酶Ⅱ,脱氢酶辅酶的一种。其为烟酰胺核苷-3′,5′-二磷酸与腺嘌呤核苷酸的缩合物。有氧化型和还原型两种形式,分别简写成NADP+和NADPH+H+。含有维生素B5,在氧化还原反应中的作用机制与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的相同。其为一些不需氧脱氢酶的辅酶,在生物体内起传递氢的作用。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADP)是一种辅酶,其广泛存在于生物界并参与众多生理过程;研究显示,所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP在细胞内主要被还原为NADPH,后者是细胞内重要的抗氧化成分,同时还参与合成代谢过程。

适应症[2]

近年来的基础与临床研究证实,氧化应激损伤是糖尿病肾病的主要发病机制之 一,利用转基因技术在肾脏过表达抗氧化酶,如超氧化物歧化酶(SOD)或过 氧化氢酶 (catalase),可以明显改善糖尿病肾脏损伤。基于现有技术的研究基础与现状,CN201610070262.4提供化合物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADP)新的药用用途,具体涉及化合物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP在制备防治糖尿病肾病药物中的用途。

CN201610070262.4通过体外细胞实验及体内动物实验,证实了所述NADP能减轻高糖对血管内皮细胞的损伤、改善糖尿病小鼠肾脏损害,进一步可用于制备防治糖尿病肾病的药物。本发明所述的制备的药物可采用腹腔注射的途径使用,使用的NADP的剂量为5- 20mg.kg-1.d-1,开始使用时间优选为糖尿病确诊开始,能对糖尿病肾病起到预防和治疗作用。本发明为临床防治糖尿病肾病、改善肾脏病变提供了新的靶点与思路,证实了改善肾脏的氧化应激在糖尿病肾病防治中的重要作用。

应用[3]

肌酸激酶同工酶测定试剂盒(选择性抑制法)用于测定人体血清或血浆中肌酸激酶同工酶的含量。血清CK-MB(肌酸激酶同工酶)测定的最重要意义在于诊断急性心肌梗塞。临床上常以CK-MB超过CK总活性作为急性型肌梗塞的诊断依据。肌酸激酶是细胞内能量转 运、代谢起着至关重要的激酶。肌酸激酶同工酶是肌酸激酶的一种同工酶,是在翻译后修饰 过而生成的,主要存在于心肌细胞中(还有少量存在于骨豁肌、肠道、舌头、前列腺以及子宫中),是心肌能量代谢途径中非常重要的肌酸激酶,由两个亚基组成,代表肌肉和大脑。

肌酸激酶同工酶的检验原理为肌酸激酶(CK)主要的同工酶包括CKMB、CKBB、CKMM, 因为正常血清中几乎无CKBB,抗M亚单位的抗血清可以和CKMM及CKMB中的M亚单位形成抗原 抗体复合物,从而完全抑制M亚单位的酶活力,将测得的CK活力值乘以2则代表CKMB的活力。肌酸激酶(CK)活力的检测原理是:CK催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷(ADP)反应产生三磷酸腺 苷(ATP)与肌酸;偶联己糖激酶(HK)及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)的催化反应。HK催化葡 萄糖与ATP反应,形成葡萄糖-6-磷酸,G6PDH催化葡萄糖-6-磷酸氧化,形成6-磷酸葡萄糖内 酯及NADPH,NADPH生成的速率代表CK活力。

由于抗原是蛋白,本身稳定性极差,在室温条件下小时内会全部降解.肌酸激酶同工酶在满足临床要求后,对其进行稳定性评价。肌酸激酶同工酶测定试剂盒(免疫抑制法) 要攻克的一个难点就是试剂稳定性,必须满足37℃热破14天后各个性能指标还能满足偏差小于10%的要求。而现有试剂难以达到上述要求。

CN201711008283.4提供一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法,在37℃保存14天的情况下,本发明仍保持了较高的试剂稳定性,试剂的测值偏差小于10%。所述方法包括如下步骤:

1)称量N-乙酰半胱氨酸、磷酸肌酸、二磷酸腺苷、三磷酸腺苷、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、己糖激酶、肌酸激酶同工酶抗体、聚乙烯吡咯烷酮、月桂基二羟乙基氧化胺及异构抗坏血酸钠,溶解于水中,得到混合液,将所述混合液与咪唑缓冲液混合后,加入三(壬苯基)亚 磷酸酯溶解,得到试剂I溶液;

2)称量烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸与葡萄糖,溶解于水中,得到试剂II溶液。

本发明的有益效果是:本发明肌酸激酶同工酶测定试剂盒试剂I中添加了聚乙烯 吡咯烷酮、月桂基二羟乙基氧化胺及三(壬苯基)亚磷酸酯,另外还含有抗氧化剂异构抗坏血酸钠,提高了试剂的保存稳定性。经过验证,2-8℃下本发明保质期可以长达一年半,极大的提高了实际的货架期,其运输稳定性也大大提高。对于偏远山区样本量少的乡镇医院有很大的帮助。且在37℃保存14天的情况下,本发明仍保持了较高的试剂稳定性,试剂的测值偏差小于10%。  

主要参考资料

[1] 农业大词典

[2] CN201610070262.4 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸在制备防治糖尿病肾病药物中的用途

[3] CN201711008283.4 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法

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