无血清细胞冻存液的使用方法

2025/8/18 16:27:11 作者:贝克曼

无血清细胞冻存液,含有5%的二甲基亚砜(DMSO),对细胞的毒性较低;不含动物来源性蛋白或血清,配方成分明确,不仅适用于常规细胞系、原代细胞,同时亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。

无血清细胞冻存液

使用方法

(一) 细胞冻存

1. 取对数生长期的细胞,去除旧培养液,加入 PBS 清洗细胞;

2. 去除 PBS,加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面) 室温孵育 2~3 min,把单层生长细胞消化下来;

3. 加入双倍体积的完全培养基或胰酶终止剂终止细胞消化(如果冻存细胞为悬浮细胞按照步骤 4-8 进行操作);

4. 将消化后的细胞悬液或者悬浮细胞液转移至离心管中,进行细胞计数;

5. 室温 1000 rpm 离心 5 min;弃掉上清液;

6. 加入适量 4℃预冷的无血清细胞冻存液重悬细胞沉淀,制成细胞悬液(按照细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存液的量,推荐冻存密度:5x105 至 1x107cells/mL;

7. 将细胞分装入冻存管中,每管 1~1.5 ml; 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者等信息;

8. 针对常规肿瘤细胞:将冻存液重悬后的细胞直接放入-80℃冰箱,过夜后转入至液氮罐中 长期保存。针对难养或珍贵细胞:将冻存液重悬后的细胞放入程序降温盒,或者程序降温后再放入-80℃冰箱,过夜后转入至液氮罐中长期保存。

(二) 细胞复苏

1. 将水浴锅温度调至 37℃,取出冻存管快速置于水浴锅内,晃动冻存管直至管中冻存细胞融化成液体;

2. 将溶解的细胞冻存悬液转移至含有 5-10 倍体积完全培养基的离心管中,待冻存管中细胞完全融化后,将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中,轻轻混匀;

3. 室温 1000 rpm 离心 5 min; 去除上清液,加入已回温的完全培养基重悬细胞,进行细胞计数,根据计数结果,取适量的细胞悬液接种到新的培养瓶内;

4. 将培养瓶转移至 37℃,5% CO2 培养箱中,按常规方法培养。

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