简介
多肽试剂TOTU为白色至类白色针状或颗粒状结晶，熔点 125–130 °C（分解），几乎无嗅。其晶体结构以脲鎓阳离子为核心：中心季铵化的 N,N,N′,N′-四甲基脲鎓骨架通过 N=C 键与活性离去基团“乙氧羰基氰基亚甲胺”相连，形成共轭吸电子体系；配对阴离子为四氟硼酸根 BF₄⁻，整体呈离子型盐，易溶于乙腈、DMF、DMSO等极性非质子溶剂，微溶于二氯甲烷，不溶于水与烷烃。该结构赋予多肽试剂TOTU强大的羧酸活化能力[1]，同时避免了传统HOBt/HOAt类试剂潜在的爆炸性副产物，是目前最常用的高收率、低外消旋肽偶联活化剂之一。
图1 多肽试剂TOTU的性状
合成
哌啶在DMF中除去剩余的Fmoc基团。然后用DMF、二氯甲烷、异丙醇和甲基叔胺洗涤树脂。丁醚，然后真空干燥。在1.42 ml二氯甲烷中加入0.9 ml间甲酚，然后加入14 ml三氟乙酸和1 ml三甲基硅基溴，将肽从树脂中分离出来。2.5 h后，将混合物滤入200 ml冷甲基叔丁醚中。将沉淀的固体过滤掉，然后溶解在水中，用乙酸乙酯提取水溶液以去除清除剂。然后用离子交换树脂Dowex IRA 93（醋酸形式）处理水溶液，过滤和冻干。粗肽（267 mg）经Sephadex LH 20柱层析纯化得到标题化合物多肽试剂TOTU[2]。
保存方法
TOTU对水分与温度极为敏感，必须全程在干燥惰性气氛下保存。长期储存应置于–20 °C冷冻冰箱，瓶内预置4Å分子筛或变色硅胶，瓶口先用聚四氟乙烯内衬螺旋盖旋紧，再外包两层Parafilm，最后放入铝箔袋抽真空封合，以隔绝湿气和光照。日常使用时，提前将整瓶置于室温干燥器内平衡十分钟，立即在手套箱或干燥氮气流下称取所需量，剩余试剂迅速回封并放回–20 °C，避免反复冻融。
参考文献
[1] National Center for Biotechnology Information. "PubChem Compound Summary for CID 2733286, O-[(Ethoxycarbonyl)cyanomethylenamino]-N,N,N',N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate" PubChem, https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/totu. Accessed 13 August, 2025.
[2] Current Patent Assignee: sanofi aventis deutschland- US5166394, 1992, A.