香豆素 314(Coumarin 314)，又称香豆素504，是一种高荧光量子产率、红光发射的7-氨基香豆素类激光染料，因其刚性结构而具备优异的光稳定性与光谱性能。
制备方法
步骤1:将化合物1溶解于40-50倍重量的乙醇中,将2-3倍重量的正丁胺加入,90°C反应12h得到化合物2;
步骤2:将得到的化合物2溶解于5-10倍重量的乙二醇甲醚中，加入2-3倍重量的水合肼,120°C反应4h抽滤得到化合物3;
步骤3:将得到的化合物3溶解与20-30倍重量的3-甲基-2-丁酮中，加入2-3倍重量的催化剂,90°C反应4h,旋转蒸发除去多余溶剂后,分散到乙醇中,滴加少量氨水后抽滤得到化合物4;
步骤4:将化合物5的DMF溶液缓慢滴加到POCl3/DMF中,先冰浴后70°C搅拌2h,然后将反应液倒入5-10当量水中,抽滤得化合物6;
步骤5:将得到的化合物6溶解与30-50倍重量的乙醇中,加入20-30倍重量的丙二酸二乙酯,加催化剂后,85°C反应3h,旋转蒸发除去多余溶剂后得到化合物7即香豆素 314。
应用
专利CN201910501487.4实施例3制备化合物Ⅷ：取1g(3.53mmol)化合物Ⅶ和0.283g(60％，7.084mmol)氢化钠溶于甲苯中搅拌，107摄氏度油浴加热回流后加入2.21g(7.06mmol)化合物Ⅵ即香豆素 314，搅拌反应混合物并加热回流5小时，反应液冷却至室温，倒入稀释的盐酸(5％，100mL)和二氯甲烷萃取三次，用分离漏斗分离有机层，收集有机层在无水硫酸钠上干燥后，溶剂在旋转蒸发仪蒸发。用二氯甲烷重结晶抽滤得到0.7g固体，即为化合物Ⅷ，产率36％。该染料的结构特征；1HNMR(500MHz,Chloroform-d)δ＝8.35(s,2H),8.11(s,1H),6.90(s,2H),3.26(d,J＝5.9Hz,8H),2.83(s,4H),2.70(t,J＝6.5Hz,4H),1.98-1.82(m,9H)。
刘立新等人建立了一台基于高重复频率扫描相机的双光子激发时间分辨荧光光谱测量系统,能够同时测量样品的荧光光谱和寿命。该系统的时间分辨率为6.5-200ps,光谱分辨率为1-3nm,能够实现快速数据采集以及可靠和可重复的寿命和光谱测量。利用标准荧光染料(若丹明6G、香豆素 314)及其混合溶液对该系统进行了测试,所得到的荧光光谱分布和寿命值与文献报道一致。实验结果表明,该系统能有效区分多组分荧光团，这为鉴别多荧光团或多组分生物组织提供了一种独特的对比方法,可用于多光谱分辨荧光寿命成像和荧光共振能量转移成像等方面。
参考文献
[1] 华东理工大学. 一种长发射波长荧光染料的制备方法:CN201510664316.5[P]. 2016-05-11.
[2] 青岛科技大学. 一类香豆素为骨架的β-二酮氟化硼荧光染料的制备和应用:CN201910501487.4[P]. 2019-08-09.
[3] 刘立新,屈军乐,林子扬,等. 双光子激发时间分辨荧光光谱测量技术[J]. 物理学报,2006,55(12):6281-6286. DOI:10.3321/j.issn:1000-3290.2006.12.015.