研究背景
DL-酪氨酸是酪氨酸的消旋体,包含L-酪氨酸(天然存在形式)和D-酪氨酸(非天然异构体)两种形式。DL-酪氨酸属于芳香族非必需氨基酸,是肾上腺素、去甲肾上腺素及多巴胺的前体物质,主要参与蛋白质合成、神经递质代谢等过程。目前,市面上售卖的相关产品性状为白色结晶粉末,稳定性较好。

生产方法
生物化学领域公开了一种酶法生产DL-酪氨酸的方法,包括以下步骤:S1,构建重组表达载体pET32a-PH0138,转化到大肠杆菌BL21(DE3)/pGKJE8中,获得重组工程菌BBAR;S2,发酵表达BAR酶的重组工程菌BBAR获得湿菌体;S3,将湿菌体混悬后进行破碎处理,破碎液为含有广谱型氨基酸消旋酶的粗酶液;S4,向步骤S3获得的粗酶液中添加L-酪氨酸和PLP,搅拌转化,直至比旋光度为0°时终止反应即可获得DL-酪氨酸水溶液。该方法具有原料价格低廉,转化率高,后处理简便的优势,产品质量高,适合工业化大生产[1]。

检测方法
方法一
在甲醛存在下,高锰酸钾与 DL-酪氨酸能够发生化学发光反应,产生很强的化学发光。据此采用流动注射技术可以建立一种测定 DL-酪氨酸的化学发光分析法。该方法的检出限为 2.9×10-8 g/mL,相对标准偏差为1.5%(1.0×10 -6 g/mL DL-酪氨酸,n=11),线性范围为 1.0×10-7g/mL~5.0×10-6 g/mL[2]。
方法二
利用循环伏安法(CV)将孔雀 石绿(MG)修饰于玻碳电极(GCE)表面,制备得到聚孔雀石绿薄膜修饰电极(简称PMGE)。利用循环伏安法,研究了PMGE对DL-酪氨酸电催化作用, 建立了一种对DL-酪氨酸进行定量分析的新方法。在0.2mol/LKH2PO4-Na2HPO4(pH=6.86)缓冲溶液中,DL-酪氨酸的浓度在 6.3×10-5mol/L~3.2×10-4mol/L范围内与氧化峰电流呈现出良好的线性关系,线性相关系数γ=-0.9989,检测限可达 8.0×10-6mol/L。8次样品平行测定结果的相对标准偏差不大于2.1%,样品回收率在98.2%~105.3%之间,可用于实际样品中DL-酪 氨酸的定量分析[3]。
应用
以DL-酪氨酸为原料,经酶法可得手性D-酪氨酸。具体地,先将DL-酪氨酸与酰化试剂在有机酸条件下酰化反应制备N-乙酰-DL-酪氨酸,将N-乙酰-DL-酪氨酸和去离子水配制成0.5-1.0mol/L的溶液,用碱调节pH值,过滤后得到N-乙酰-DL-酪氨酸溶液,该溶液通过固定有D-酰化水解酶的酶柱,反应后洗脱,反应液用脱色剂脱色,过滤,浓缩,冷却,结晶,并用少量去离子水漂洗,经干燥得到D-酪氨酸,结晶母液可制备L-酪氨酸。上述由DL-酪氨酸酶法制备D-酪氨酸的工艺可用于大批量工业生产[4]。
有关研究
电化学领域,用吸附法将C-十一烷基间苯二酚杯[4]芳烃固定在玻碳电极上制成杯芳烃膜电极,对DL-去甲肾上腺素,尿酸,DL-酪氨酸,邻苯二酚进行了测定,该电极对DL-去甲肾上腺素和邻苯二酚具有良好的响应,其线性范围分别为4.0×10-5~8.0×10-4和2.0×10-4~2.0×10-3mol·L-1,检测下限分别为1.25×10-5和1.0×10-5mol·L-1,对尿酸,DL-酪氨酸没有响应,试验发现杯芳烃膜电极不但具有选择性,而且有较快的响应速度,良好的重现性和稳定性[5]。
参考文献
[1]李晚军,曾帅,刘鹏,et al.酶法生产DL-酪氨酸的方法及广谱型氨基酸消旋酶,应用:CN202110290551.6[P].
[2]何云华,王志银.流动注射化学发光法测定DL-酪氨酸[J].分析试验室, 2002.DOI:CNKI:SUN:FXSY.0.2002-03-022.
[3]孙元喜,丁颖,周谷珍.利用聚孔雀石绿薄膜修饰电极测定DL-酪氨酸[J].湖南文理学院学报:自然科学版, 2009, 21(1):4.DOI:10.3969/j.issn.1672-6164.2009.01.011.
[4]马云峰,柴多里,王组元.酶法制备D-酪氨酸的方法:CN200610082015.2[P].
[5]高孟姣,张晓岚,应太林,等.杯芳烃膜电极研究[J].理化检验-化学分册, 2001, 037(001):7-9.DOI:CNKI:SUN:LHJH.0.2001-01-002.