SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神经母细胞瘤细胞）的生化研究

简述

SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神经母细胞瘤细胞）是源自人骨髓的神经母细胞瘤亚克隆细胞，具有与人体神经元相似的形态和生物学特性 。该细胞可通过多种分化方案转化为成熟神经元样细胞，例如，将其在基础培养基中培养至一定融合度，进行消化，获得细胞悬液；将细胞悬液铺板于培养皿以诱导培养基培养即可获得多巴胺能神经元，并可以分泌多巴胺。在优化条件下，多巴胺能神经元分化率约为15%，诱导出的DAT阳性细胞占总细胞数量的5%，分化率高，分化水平高^[1]。

兴奋性毒损伤的机制研究

为了探讨谷氨酸导致SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神经母细胞瘤细胞）兴奋性毒损伤的机制。研究人员通过MTT法检测SHSY-5Y细胞存活率；测定乳酸脱氢酶释放量观察细胞损伤程度；DAPI染色法观察细胞凋亡形态学特点；钙流法检测胞浆钙离子浓度变化；以胞内谷胱甘肽、超氧化物歧化酶活性和胞外丙二醛含量检测谷氨酸引发SH-SY5Y细胞的氧化应激状态。结果，谷氨酸导致SH-SY5Y细胞受损，包括存活率下降、乳酸脱氢酶释放量增多及形态结构发生改变;谷氨酸处理 20 min 后,胞浆钙离子浓度无显著改变,而处理 24 h 后,胞浆钙离子大量增加，且 MK801 (NMDA受体拮抗剂)及LY341495 (代谢型谷氨酸受体拮抗剂)均不能抑制钙离子内流的增多；谷氨酸可导致SH-SY5Y氧化损伤，包括胞内谷胱甘肽含量减少、超氧化物歧化酶活性降低、胞外脂质过氧化产物丙二醛水平升高等，而丹参酮IIA (一种抗氧化剂)可减轻这些氧化损伤。也就是说，谷氨酸导致SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神经母细胞瘤细胞）兴奋性毒损伤可能是通过氧化损伤产生的，而不依赖于 NMDA 受体介导的钙稳态的破坏^[2]。

内质网应激的影响研究

为了研究β-淀粉样蛋白(Aβ(25~35))对SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神经母细胞瘤细胞）凋亡过程中内质网应激的影响，探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用。研究人员将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)，5，10，20，30，,40μmol/L Aβ(25~35)的培养基染毒48 h，采用CCK8法检测细胞活性。将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)，5，10，15μmol/L Aβ(25~35)的培养基染毒24，48和72 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)，蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平。通过实验结果可知： Aβ(25~35)可以诱导SH-SY5Y [SHSY-5Y]（人神经母细胞瘤细胞）内质网应激，导致其发生凋亡^[3]。

参考文献

[1]宋振涛,陈恒,曲廷瑜.一种诱导SH-SY5Y细胞分化为多巴胺能神经元的方法.CN201710591673.2.

[2]孙中伟,张蓝,竺淑佳,等.谷氨酸致人神经母细胞瘤细胞兴奋性毒损伤的机制[J].Neuroscience Bulletin, 2010(1):8-16.DOI:10.1007/s12264-010-0813-7.

[3]徐彦吉,张金婵,任启智,et al.β-淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响[J].环境与健康杂志, 2017(1).DOI:10.16241/j.cnki.1001-5914.2017.01.009.