4-硝基苯基-N-乙酰-beta-D-半乳胺是一种人工合成的显色性糖苷底物，主要用于β-N-乙酰半乳糖胺苷酶的活性检测与动力学研究。
下游产物合成
1 4-硝基苯基 2-(乙酰氨基)-2-脱氧-4,6-O-[(S)-苯基亚甲基]-β-D-半乳糖苷，收率： 92% 取 4-硝基苯基 2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-半乳糖苷 (5.09 mmol)， 无水DMF（30 mL）、苯甲醛二甲基缩醛（1.16 mL）和4-甲苯磺酸一水合物（90 mg）于100 mL圆底烧瓶中。将混合物接入减压下的Biichi蒸发器中。将Biichi蒸发器置于50 °C的水浴中旋转。在蒸汽导管中回流DMF。旋转悬浮液3小时，直至形成澄清溶液。通过薄层色谱（TLC）检查反应进度。将混合物倒入饱和的NaHCO₃水溶液（200 mL）中。在室温下搅拌混合物0.5小时。过滤白色沉淀。用水和二乙醚洗涤白色沉淀。在减压下干燥白色沉淀。[1]
2 4-硝基苯基 2-(乙酰氨基)-6-O-(N-乙酰-α-神经氨酰基)-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖苷，收率： 92% 将对硝基苯基 β-D-半乳糖苷、丙酮酸钠（1当量，10 mM）、一种唾液酸前体（N-乙酰甘露糖胺 1.2当量）、 丙酮酸钠（6.0当量）和胞苷三磷酸（1.3当量）于装有Tris-HCl缓冲液（100 mM，pH 8.8）和MgCl₂（20 him）的50 mL离心管中，用水溶解。向混合物中加入适量的大肠杆菌唾液酸醛缩酶（0.2-0.75 mg）和脑膜炎奈瑟菌CMP-唾液酸合成酶（0.25-1.0 mg）。加入硅烷基转移酶（0.05-0.2 mg PmST1）及水，使反应混合物的最终体积达到10 mL。将溶液置于培养箱中，在37 °C下以125 rpm搅拌孵育4-8小时，进行反应。通过薄层色谱（TLC）（乙酸乙酯/甲醇/水/乙酸 5:2:1:0.1，v/v/v/v，对苯甲醛糖染色）监测产物形成情况。加入等体积的冰冷乙醇终止反应。将反应混合物在 4°C 下孵育 30 分钟。离心混合物以去除沉淀。浓缩上清液。将上清液通过 BioGel P-2 凝胶过滤柱，以获得目标产物。进行硅胶纯化（Teac/Meow/H₂O 5:2:1）。
3 4-硝基苯基 2-2-(乙酰氨基)-2-脱氧-6-O-[N-(2-羟基乙酰基)-α-神经氨酰基]-β-D-吡喃半乳糖苷，收率： 85% 将对硝基苯基 β-D-吡喃半乳糖苷、丙酮酸钠（1当量，10 mM）、一种唾液酸前体（N-乙酰基甘露糖胺衍生物 1.2当量）、 丙酮酸钠（6.0当量）和胞苷三磷酸（1.3当量）用水分解，加入到含有Tris-HCl缓冲液（100 mM，pH 8.8）和MgCl₂（20 him）的50 mL离心管中。向混合物中加入一定量的肠杆菌唾液酸醛缩酶（0.2-0.75 mg）和脑膜炎奈瑟菌 CMP-唾液酸合成酶（0.25-1.0 mg）。加入硅烷基转移酶（0.05-0.2 mg PmST1）及水，使反应混合物的最终体积达到10 mL。将溶液置于培养箱中，在37 °C下以125 rpm搅拌孵育4-8小时，进行反应。通过薄层色谱（TLC）（乙酸乙酯/甲醇/水/乙酸 5:2:1:0.1，体积比，对苯甲醛糖染色）监测产物形成情况。加入等体积的冰冷乙醇终止反应。将反应混合物在 4°C 下孵育 30 分钟。离心混合物以去除沉淀。
参考文献
[1] Chen, Hong-Ming; et al Syntheses of the 3- and 4-thio analogues of 4-nitrophenyl 2-acetamido-2-deoxy-β-D-gluco- and galactopyranoside Carbohydrate Research (2007), 342(15), 2212-2222