简介
UDP葡萄糖醛酸属于活化糖核苷酸类底物，多为白色粉末，易溶于水，需低温避光冷藏保存。其可作为酶促糖基化反应的糖基供体，与糖类底物、PmHS2酶共混于缓冲体系室温反应，制备糖基衍生物产物。
UDP葡萄糖醛酸的性状
制备
方法一：将预培养的SMD1168H-C-AtUSP接种到500 mL培养基中，在30°C和220 rpm下培养48小时。使用葡萄糖、甘油、山梨醇和甲醇作为碳源。在摇瓶中使用2%葡萄糖作为碳源，验证培养基的最佳温度和初始pH值。在不同温度（30°C）或pH值下培养SMD1168H-C-AtUSP，以220 rpm的速度振荡48小时。通过PAMN-HPLC测定培养上清液的USP活性。进行所有分析，一式三份，最后纯化得到标题化合物UDP葡萄糖醛酸[1]。
方法二：在含有50 mM Tris-HC白蛋白、pH 7.5、20 mM MgCl2、20 mM GlcA、24 mM ATP、24 mM UTP、2 mg/mL AtGlcAK、2 mg/mL AtUSP和2 mg/mL PmPpA的20 mL反应体系中进行UDP-GlcA合成。向反应体系中加入焦磷酸酶。将合成反应体系在37°C下孵育12小时，并分别通过TLC和ESI-MS进行监测。通过煮沸5分钟和以12000rpm离心5分钟来淬灭反应。通过Bio-gel P2凝胶尺寸排阻柱层析纯化上清液并冻干得到标题化合物UDP葡萄糖醛酸[2]。
应用
UDP葡萄糖醛酸用作酶促糖基化反应的糖基供体底物。例如：加入60μL去离子水、45μL 1 M三（羟甲基）氨基甲烷缓冲液（20 mM）、UDP葡萄糖醛酸（1 mg，60μL H2O）、2-脱氧-2-[（三氟乙酰）氨基]-α-D-吡喃葡萄糖苷-（1→4）-β-D-吡吡喃葡萄糖醛酸盐-mg/mL反应浓度）加入到塑料反应容器中。反应混合物在室温下旋转3天。每天向反应混合物中再加入等量的PmHS2酶。将反应混合物冷冻干燥。在Sephadex G-10柱上纯化产物[3]。
参考文献
[1] Zang, L. X.; et al. Production of Arabidopsis thaliana UDP-Sugar Pyrophosphorylase by Pichia pastoris and Its Application in Efficient UDP-Glucose and UDP-Glucuronic Acid Synthesis. Applied Biochemistry and Microbiology (2019), 55(6), 631-638.
[2] Wang, Yaqian; et al. Chemoenzymatic synthesis of homogeneous chondroitin polymers and its derivatives. Carbohydrate Polymers (2020), 232, 115822.
[3] Zhang, Xing; et al. Chemoenzymatic synthesis of heparan sulfate tetrasaccharide from a N-acetyl-α-D-glucosamine-O-methylglycoside acceptor. Tetrahedron Letters (2019), 60(13), 911-915.