3,4-二羟基苯甲酸甲酯(MDHB,C8H8O4)，分子量为168.15，是从植物如马兰中提取出的一种天然小分子酚类衍生物。体外研究表明，3,4-二羟基苯甲酸甲酯有很好的抗氧化和抗凋亡的能力，能够对抗离体培养神经元的神经毒性和氧化应激；同时还能够促进神经元树突的生长和BDNF蛋白mRNA的表达。
活性研究
采用视网膜退变小鼠Pde6brd10（rd10）作为动物模型，研究3,4-二羟基苯甲酸甲酯对rd10小鼠视网膜的保护作用及其作用机制。方法：通过腹腔注射的给药方式，在rd10小鼠出生后12天（P12）开始给药，包括实验组3,4-二羟基苯甲酸甲酯和对照组生理盐水（NS），野生型小鼠（WT）作为空白对照组。取P26和P45作为检测时间点，检测视网膜形态、动物视觉行为及视网膜电位。为了探讨3,4-二羟基苯甲酸甲酯的保护机制，使用TUNEL染色观察外核层（outer nuclei layer,ONL）中TUNEL阳性细胞表达情况，并通过western blotting（WB）检测实验动物视网膜中相关蛋白的表达情况。
结果：DAPI染色结果发现，在P26和P45MDHB治疗后rd10小鼠视网膜ONL中感光细胞存活率明显提高。在25mg/kg,50mg/kg,100mg/kg的给药浓度下，发现50mg/kg的MDHB对rd10小鼠视网膜的治疗效果最好。免疫荧光结果发现在3,4-二羟基苯甲酸甲酯治疗后的rd10小鼠视网膜中，rhodopsin和opsin的表达有所升高，cone arrestin显示感光细胞中的视锥的形态和结构更趋近于WT组。黑白箱穿梭实验表明，在MDHB治疗后的rd10小鼠与NS组小鼠比较，它们呆在黑箱中的时间明显变长。在3,4-二羟基苯甲酸甲酯治疗后的rd10小鼠，视网膜电位的a波的幅度得到了一定的提升，b波的幅度有显著性提升。到达a波的时间在3,4-二羟基苯甲酸甲酯治疗后显著缩短。TUNEL染色结果表明，3,4-二羟基苯甲酸甲酯治疗后，rd10小鼠视网膜ONL中TUNEL阳性细胞显著下降。WB结果显示，在3,4-二羟基苯甲酸甲酯治疗后rd10小鼠中BDNF蛋白和磷酸化的BDNF受体TrkB的表达显著升高。腹腔注射TrkB的特异阻断剂ANA-12之后，3,4-二羟基苯甲酸甲酯治疗后rd10小鼠视网膜ONL中感光细胞的存活率下降。结论：3,4-二羟基苯甲酸甲酯的治疗显著性提升了rd10小鼠视网膜感光细胞的存活率，并且保护了视网膜结构和功能。3,4-二羟基苯甲酸甲酯的保护作用机制可能是通过BDNF-TrkB信号通路促进细胞存活，减少细胞凋亡的。由于3,4-二羟基苯甲酸甲酯的神经元保护功能，3,4-二羟基苯甲酸甲酯也许可以用于治疗视网膜或者脑部退行性疾病[1]。
检测案例
马临等人建立测定白花蛇舌草中3,4-二羟基苯甲酸甲酯含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用ODS柱(200mm×4.6mm,5 μm),以甲醇-0.05%磷酸水溶液(15∶85,V/V)为流动相,在254nm波长处检测。3,4-二羟基苯甲酸甲酯浓度在2.5～50μg·ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9994);样品的加样回收率为100.4%(n=9);结果精密度及重复性良好,RSD均不大于2.6%。结论，该法简便、准确,可以作为对白花蛇舌草药材进行质量控制的一种定量[2]。
应用
专利CN202411945728.1公开了3,4‑二羟基苯甲酸甲酯在美白中的应用。本发明从鹿仙草中提取得到了3,4‑二羟基苯甲酸甲酯，并发现3,4‑二羟基苯甲酸甲酯能够通过抑制酪氨酸酶活性实现美白，在浓度为0.125mg/ml时对酪氨酸酶的抑制率为59.10％，IC50值为0.2107mg/ml，约为阳性药β‑熊果苷(IC50值为0.3763mg/ml)的二分之一，抑制活性更强。应用于美白产品中具有广阔的应用前景[3]。
专利CN201110441526.X公开了3,4-二羟基苯甲酸甲酯在制备防治神经退行性疾病药物中的应用。本发明发现了MDB或其衍生物兼有维持神经元（或神经细胞）存活和促进突起生长的双重作用，可用于开发神经营养因子拟似剂治疗神经退行性疾病（AD、PD等）及其他相关疾病；也可用于细胞及基因移植治疗神经退行性疾病（AD、PD等）及其他相关疾病。本发明确定了MDB的新的药理活性，其药效机制的阐明为开发拥有自主知识产权的新药提供借鉴[4]。
参考文献
[1] 张佳. 3,4-二羟基苯甲酸甲酯在视网膜退变小鼠模型中的神经保护作用[D]. 广州:暨南大学,2018.
[2] 马临,李俊明,陈玉青,等. 高效液相色谱法测定白花蛇舌草中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的含量[J]. 时珍国医国药,2009,20(3):528-529. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2009.03.008.
[3] 云南中医药大学. 3,4-二羟基苯甲酸甲酯在美白中的应用:CN202411945728.1[P]. 2025-04-04.
[4] 暨南大学. 3,4-二羟基苯甲酸甲酯在制备防治神经退行性疾病药物中的应用:CN201110441526.X[P]. 2012-07-11.